Масло репейное от перхоти отзывы: Mirrolla Масло репейное с ромашкой

Содержание

Репейное масло полезно только сухим волосам

Как правильно выбрать расчёску, стоит ли ходить зимой без шапки и как часто можно красить волосы — все эти и многие другие вопросы мы задали врачу-дерматовенерологу, трихологу и косметологу клиники Prima Vita Татьяне Андреевой.

— Что это за врач такой — трихолог, и чем вообще он занимается?

Это обязательно специалист с высшим медицинским образованием, дерматолог, который специализируется на лечении заболеваний, связанных с ростом и состоянием волос. Зачастую проблемы с волосами обусловлены патологией внутренних органов и систем организма, поэтому лечить должен именно врач, а не работник со средним медицинским образованием и тем более парикмахер.

— С какими проблемами приходят к вам чаще всего?

— Это, в первую очередь, проблема выпадения волос. И, к сожалению, обычно приходят уже после длительного домашнего лечения, а оно зачастую оказывается неэффективным. Также обращаются с жалобами на изменение качества, структуры волос, проблемами кожи головы, вроде перхоти.

— Кто больше озабочен своими волосами — женщины или мужчины?

— В равной степени. Женщин чаще всего волнует общее состояние волос, отсутствие блеска, усиленное выпадение, ну, а мужчины обращаются с алопецией — сильным выпадением волос, приводящим к появлению залысин. Обычно такие мужчины уже долгое время лечились всевозможными бальзамами, лосьонами, шампунями, но в итоге пришли на консультацию к врачу.

— Что стоит считать поводом для обращения к врачу?

— Если появилось выпадение волос и продолжается дольше одного месяца, лучше провериться. Примерная норма выпадения в сутки — 60-80 волос. Ещё один повод — появление очагов залысин, ломкости, сечённых кончиков, перхоти, избыточной жирности кожи головы. Волосы, кожа и ногти — это зеркало состояния организма. Мы можем сказать им за это спасибо, потому что если вовремя обратить внимание на тревожные признаки, можно не только предотвратить какую-то серьёзную болезнь, профилактировать её, начать её лечить. Как я уже и говорила, иногда причинами простой эстетической проблемы становятся какие-то сбои в организме в целом.

Алкоголь, сигареты и зимние прогулки без шапки

— Влияет ли наш образ жизни на состоянии волос?

— Как и на весь организм. Если у вас нет каких-то индивидуальных проблем со здоровьем, то красота волос достигается комплексно. Это здоровый образ жизни, в меру — занятия спортом, здоровый сон не менее 8 часов в сутки, также нужно выпивать минимум 1,5-2 литра воды в день, если нет каких-то противопоказаний. Обезвоживание также влияет на качество волос. Ешьте побольше фруктов, овощей — они содержат витамины, микроэлементы, которые необходимы для роста и хорошего состояния волос. Правильный образ жизни отразится не только на волосах, но и коже, ногтях.

— Как курение и алкоголь влияет на волосы?

— Спиртное влияет напрямую, курение — опосредовано. При употреблении алкоголя происходит замедление регенерации волос — они становятся хрупкими, ломкими, утрачивают естественный красивый блеск.

В первую очередь, это происходит из-за способности спиртосодержащих веществ приводить к обезвоженности организма. Алкоголь поглощает влагу, обезвоживает не только волосы, но и кожу. В результате может также появиться перхоть, зуд кожи головы. Всё, конечно, зависит от частоты употребления алкоголя. Если это происходит эпизодически, то, как правило, системного воздействия нет. А вот при регулярном злоупотреблении и алкогольной зависимости последствия будут.

Никотин напрямую на фолликулы волоса не воздействует, но оказывает очень негативное влияние на эндокринную, половую систему человека. А отклонения в работе этих систем в свою очередь влекут и проблемы с волосами. Курение также негативно влияет на сосуды, вызывает их сужение, нарушается питание кожи головы, в итоге фолликулы плохо снабжаются кровью. Как итог — выпадение и ухудшение качества волоса. Так что от вредных привычек желательно отказаться. Курящие и выпивающие люди находятся в группе риска по выпадению волос.

— Нужно ли носить зимой шапку?

— Кратковременное воздействие низких температур может быть полезно, как при азототерапии. Происходит стимуляция фолликулов и кровоснабжения, но если человек находится на сильном холоде более 10 минут, то происходит обратная реакция — сильный спазм сосудов, нарушается кровоснабжение, питание волоса и запускается механизм выпадения. Жара и прямые солнечные лучи также оказывают негативное воздействие, потому что усиливается салоотделение, страдает сама структура волоса. Желательно в жару тоже надевать какие-то лёгкие головные уборы. Кончики волос можно под головной убор не прятать, на них температура такого воздействия не оказывает.

Бабушкины методы

— Работают ли бабушкины методы? Например, раньше считали, что хозяйственное мыло, использование репейного масла или расчёсывание по 100 раз помогают сохранить красоту волос.

— Хозяйственным мылом голову мыть не стоит — это приводит к пересушиванию кожи головы. Лучше подбирать шампунь в зависимости от особенностей волос.

Расчёсывание, конечно, необходимо волосам, оно несёт как эстетическую функцию, так и помогает естественно увлажнить волосы по всей длине. Но 100 раз слишком много, 15-20 вполне достаточно.

Репейное масло нет смысла использовать всем. Если кожа головы и соответственно волосы у человека жирные, то масло только усугубит эстетическую проблему и никакого эффекта по улучшению структуры волоса не окажет. Если кожа и волосы сухие, то можно применять, но как монолечение я бы всё равно не рекомендовала.

— Есть мнение, что можно волосы приучить мыться реже. Это правда?

— В домашних условиях выдерживать грязную голову, надеясь на то, что волосы привыкнут к более редкому мытью, не стоит. Скорее всего, проблема не будет решена. Потому что чаще проблема жирной кожи головы идёт изнутри — это либо нарушение гормонального фона, либо неправильное питание, либо ещё что-то.

— Правда ли, что существует привыкание к шампуням?

— Шампунь сам по себе не предназначен для питания кожи головы и волос, потому о привыкании говорить нельзя. Он наносится и быстро смывается, основная задача — убрать загрязнение и излишки жира. При подборе шампуня мы ориентируемся на состояние волос и кожи головы, всё это очень индивидуально. Бывает такое, что человек прекрасно и долго пользуется одним видом шампуня и не испытывает дискомфорта. Меняется состояние волоса — меняем шампунь. Поэтому, если, вдруг, вы ощущаете, что привычный шампунь больше не оказывает такое же воздействие, как раньше, скорее всего, это связано с самими волосами.

Массажные щётки, окрашивание и ранняя седина

— Какие основные ошибки при уходе за волосами допускают люди?

— Нельзя расчёсывать мокрые волосы, особенно, если они склонны к запутыванию. Желательно немного их подсушить и только после этого аккуратно расчесать. Ещё одна ошибка — частое мытьё головы, это тоже негативно действует на качество волос, так как приводит к пересушиванию, нарушению водно-липидной мантии кожи головы, происходит обезвоживание.

— А как же шампуни, которые «подходят для ежедневного использования»?

— Это больше приём маркетинга, я считаю. Мыть голову ежедневно всё равно нежелательно, хотя понятно, что грязные волосы вызывают дискомфорт. Можно попробовать, например, сухие шампуни и использовать их в качестве аналога, но тоже злоупотреблять не надо. Ещё одна вечная проблема — неправильная сушка волос с использованием высокотемпературных режимов фенов, щипцов, утюжков. Происходит перегрев волоса, он становится ломким и отпадает. Но всё это частности — самая главная ошибка — игнорирование изменений состояния волос после экспериментов со своей внешностью. Волосы подают сигнал, что пора остановиться, но люди продолжают их завивать, выпрямлять, радикально перекрашивать.

— Насколько эффективны обычные шампуни, продающиеся в каждом супермаркете?

— В обычных магазинах в основном представлены средства для здоровых волос и кожи головы, которые не требуют пристального внимания и тем более лечения. Они больше направлены на уход, если есть какие-то реальные проблемы с волосами, то требуются средства, которые не продаются в обычных супермаркетах. Они есть в специализированных магазинах, магазинах профессиональной косметики, аптеках и клиниках соответствующего профиля.

— Какую расчёску лучше использовать?

— Рекомендуют использовать расчёски и щётки из натуральных материалов — дерево, каучук, щетина. Они максимально бережно относятся к волосам и снимают лишнюю электрическую статику, для мягких и пушистых волос лучше использовать расчёски с мягкими зубьями, для жёстких с жёсткими. Для пышных волос хорошо подходят расчёски с длинными редкими зубьями. А вот щётки с шариками на концах зубьев больше предназначены для массажа кожи головы, чем для расчёсывания, они могут вести к посечённым кончикам, расслоению волоса по длине. Людям с жирным типом волос, если нет проблемы с выпадением, их лучше не использовать. Если такая проблема существует, то в небольшом количестве. Ну и нужно следить за чистотой расчёски — мыть и просушивать.

— Как часто можно красить волосы или лучше этого вообще не делать?

— Красить волосы можно и даже нужно, это решает эстетическую проблему седины.

Кому-то не идёт светлый цвет волос, кому-то тёмный. Но аммиачные красители очень агрессивны, поэтому не стоит их использовать чаще раза в 1,5-2 месяца. Безаммиачные можно немножко чаще — где-то раз в месяц, они не настолько вредят волосам. И конечно, всё ещё зависит от качества краски и состояния волос.

— Почему появляется седина, иногда даже у молодых людей?

— Седой волос — это волос лишённый меланина. В естественных условиях седина появляется у мужчин в 35, у женщин в 40-50 лет. Связано это с гормональным фоном, у женщин гормоны эстрогены замедляют старение. Седые волосы могут появляться и у молодых из-за стресса, наследственности, состояния здоровья, неправильного образа жизни: злоупотребления алкоголем, курением, недостаточной физической активности, сна.

— Ещё одна постоянная проблема — секущиеся кончики. Почему это происходит?

— Причина — недостаток влаги внутренней и внешней влаги, витаминов A, E, C, D, H, F, PP и витаминов группы B, Омега-3 жирных кислот и микроэлементов — в первую очередь цинка, кальция, магния и кремния. Также может это быть связано с неправильным питанием — чрезмерным употреблением сладкого, к примеру. Происходит прямое попадание углеводов в организм — это влияет на поджелудочную железу, включаются иммунные механизмы, всё это тоже без последствий не обходится. Также к таким нежелательным продуктам можно отнести кофеин, алкоголь, фастфуд, сладкую газированную воду. Одной из причин являются хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, в первую очередь гастрит, также это может быть дисбактериоз, сезонное употребление антибиотиков и в связи с этим не восстановление флоры кишечника. Можно говорить и о плохой экологии, генетической предрасположенности, неправильном уходе — про него мы говорили выше. Слишком длинные волосы часто секутся — на них просто не хватает питания. Приходится подстригать.

— Как часто стоит это делать, влияет ли стрижка, к примеру, на нарождающуюся луну, на рост волос?

— Эстетический момент можно не обсуждать — стригитесь хоть каждый день, если хочется. Чтобы избежать тусклых и посечённых кончиков рекомендую подстригать их в среднем раз в 1,5-2 месяца — на 1-2 сантиметра. Рост волос с фазами луны не связан и обусловлен генетикой, уходом и общим состоянием. Обычно в месяц волосы вырастают на 1-2 сантиметра, но всё индивидуально.

Мария Шестакова21:45, 29 декабря 2015

Шампунь Pharma BIO LABORATORY репейное против перхоти 200 мл

Репейный шампунь против перхоти Pharma BIO LABORATORY создан квалифицированными фармацевтами для комплексного ухода за волосами. Благодаря этому средству можно избавиться от покраснений, воспалений, зуда кожи головы, а также от различных грибковых заболеваний. Это эффективное средство на натуральной основе без сульфатов, парабенов и вредных красителей, которое нежно очищает волосы и делает их более крепкими.

Как действует?

В составе средства до 52 % — целебные отвары трав (корень репейника, аир, крапива, любисток, листья березы, клевер, шишки хмеля), которые имеют противовоспалительные и антисептические свойства. Компонент SymCalmin® помогает уменьшить покраснение кожи головы. Репейное масло питает волосяные луковицы и увлажняет волосы от корней до кончиков. Бороться с перхотью помогает уникальный компонент Octopirox®. При регулярном применении репейного шампуня против перхоти Pharma BIO LABORATORY можно получить такие результаты:

полное избавление от перхоти;
восстановление микрофлоры головы;
нормализация водно-жирового баланса;
укрепление волос.

Что учесть при использовании?

Эффективность лечебного шампуня доказана клиническими исследованиями. Продолжительность использования определяется индивидуально.

Decoctum №1** (Aqua Arctiummajus R, Urtica dioica L., Levisticum officinale L., Betula alba L., Trifolium Pratence L., Humulus Luputus, Acronis Calamus R.), Cocamidopropyl Betaine, Disodium Laureth Sulfosuccinate, Sodium Myreth Sulfate, Disodium Cocoamphodiacetate, Glycerin, Sodium Chloride, Piroctone Olamine, PEG-4 Rapeseedamide, Polyquaternium -7, Milk Acid, Vitamins Complex: Propylene Glycol, Alcohol, Hamamelis, Virginiana Distilate, Panfhenol, Butylene Glycol, Arnica Montana, Flower Wather, Niacinamide, Thiamine HCL, Tocopheryl Acetate, Retinyl Palmiate, Retinyl Acetate, Biotine: Panthenol, Trimethylglycine, PEG-7, Glyceryl Cocoate, PEG-200 Glyceryl Palmate; Butylene Glycol, Pentylene Glycol, Dihydroavenanthramide D; Populus Nigra Extract, Artemisia Absinthium Extract, Sodium Salicylate, Hydroxypropyl Methylcellulose, Allantoin, Melaleuca Alternifolia (Tea Tree) Leaf Oil, Cymbopogon Schoenanthus (Lemongrass) Oil, PEG- 40 Hydrogenated Castor Oil, Lavandula Angustifolia Oil, PEG-14M, Benzyl Alcohol, 5-Chlor-2-Methyl-4-Isotiazolinone-3-on.

Намочите волосы. Небольшое количество шампуня вспеньте в руке и нанесите на волосы. Помассируйте корни волос. Смойте большим количеством теплой воды. Для получения лучшего эффекта рекомендуем повторить процедуру.

Хороший помощник: репейное масло от перхоти, ломкости, выпадения волос

Здоровые волосы — одна из составляющий красоты. Каким бы ни было красивым лицо, грязные, сальные с перхотью волосы все равно будут отталкивать. А ведь от появления перхоти не застрахован никто. Она появляется, когда на коже головы поселяется грибок. и избавиться от перхоти можно только лишь при помощи специальных средств. Можно пойти в аптеку и купить специальные шампуни или маски, избавляющие от грибка. А можно воспользоваться средствами народной медицины. К примеру, репейное масло от перхоти используется с давних времен.

Содержание:

Репейник – интересное растение

Репейник ли лопух нам всем знаком с самого детства. Ну кто, скажите, не бросался в соседского мальчишку колючками репейника или не лепил из них собачку или мишку? Забавное растение, которое учеными относится к разряду рудеральных. Что значит рудеральное растение? Такое интересное слово означает всего лишь, что растение – мусорное, сорняк, растущий, где только можно.

Растет репейник практически везде, на всех континентах, в полосе умеренного климата. Этому способствовали его плоды – колючки, цепляющиеся за шерсть животных и одежду человека. Вернее, колючки у лопуха – это нижние листочки цветов, имеющие ланцетную форму, заостряющиеся к краю и заканчивающиеся крючком.

О том, что лопух или репейник используется в медицинских целях с давних времен знают, пожалуй, все. а вот о том, что он до сих пор в некоторых странах Востока употребляется в пищу как овощ, слышали не многие. для этого лопух выращивают таким образом, что бы его корень стал максимально большим. По вкусу корень репейника чем-то напоминает артишок, кстати, родственника лопуха.

В нашей же стране лопух – одно из популярных лекарственных растений, которое успешно используется и в лечении многих болезней и в косметологии.

В лекарственных и косметических целях чаще всего используют корни лопуха. Хотя полезные вещества содержат и листья и стебли и цветы.

Репейное масло – для здоровья и красоты волос

В корне лопуха содержится немало полезных веществ. Начнем с того, что в нем много инулина – вещества, которое относится к группе пищевых волокон, при расщеплении разлагается на глюкозу и фруктозу – заменитель сахара.

Так же в корне лопуха много протеинов, витаминов, кислот, минералов, дубильных веществ. Еще корень лопуха содержит бардановое масло, которое ценно питательными компонентами для кожи, ногтей и волос.

Сегодня репейное мало можно купить в любой аптеке или же магазине косметики. Его получают путем настаивания корня лопуха на растительном масле, чаще всего миндальном или оливковом. Если есть желание, то получить репейное масло можно и дома, выкопав корень лопуха, промыв его, очистив, порезав на небольшие кусочки и залив в темной стеклянной бутылке оливковым маслом.

Репейное масло используется в качестве косметического и лечебного средства при проблемах с волосами. Еще в давние времена было замечено, что нанесение масла из корня лопуха на кожу головы позволяет значительно улучшить их состояние. Мы по сей день пользуемся бабушкин способом сделать волосы крепкими, красивым, здоровым.

Перхоть может появиться по многим причинам, естественно, что установить ее должен знающий врач. Но бороться с этой неприятной проблемой можно при помощи репейного масла. Все активные компоненты, содержащиеся в нем, способствуют нормализации обменных процессов в коже головы, улучшению структуры волос, их оздоровлению.

Репейное масло – универсальное средство для лечения и укрепления волос. Оно используется как самостоятельное средство, так и в составе многих косметических средств.

Самостоятельно репейное масло используют как маску или обертывание. Для лечения перхоти репейное масло следует нанести на кожу головы, затем обернуть голову полиэтиленовым пакетом, обернуть чем-нибудь мягким и теплым, типа хлопчатобумажного платка и шерстяной шали, и оставить на несколько часов.

В качестве лекарственного средства репейное масло можно использовать как составляющую многих масок, обертываний для волос и кожи головы. К примеру, несколько капель репейного масла можно добавить в яичный желток, смешанный с ложкой коньяка. Такая маска не только оздоравливает волосы, но и придает им натуральный блеск и шелковистость.

А вот еще видео-рецпт для волос на основе репейного масла

Использование репейного масла самого по себе может иметь одну проблему – оно плохо смывается. Для того, что бы удалить репейное масло с кожи головы и волос придется потрудиться – промыть голову подходящим шампунем несколько раз или же добавить к воде, в которой предстоит мыть голову, обычную поваренную соль. Когда волосы промоются от масла, их следует ополоснуть настоем ромашки или крапивы.

Будьте здоровы и красивы!

отзывы об эфирном масле из черного и красного перца от Fito косметик

Красивые и ухоженные волосы – это всегда модно и красиво. Разрушительное воздействие негативных факторов окружающей среды отрицательно сказывается на состоянии наших локонов. Волоски начинают выпадать, медленнее расти, обретают тусклый и нездоровый вид. Для того, чтобы вернуть здоровье своим прядям, необходимо насыщать их питательными веществами и стимулировать их рост. Для этого разрабатываются специальные комплексы по уходу, включающие в себя полезнейшие компоненты.

Польза красного перца

Полезное действие красного перца на волосы обусловлено присутствием в его составе капсаицина, придающего остроту. Капсаицин ввиду своей жгучести раскрывает поры, проникает вглубь и стимулирует корни к интенсивному росту, вызывая улучшение кровообращения. Красный перец очень часто включают и в рецептуру средств от перхоти.

В результате раздражающего воздействия красных перчинок на фолликулы, ваша прическа стане пышнее, а волоски крепче. При регулярном использовании перца скорость роста увеличивается в несколько раз, они становятся гуще и толще. Применение перца возможно не только для женщин, но и для мужчин, которые мечтают избавиться от залысин.

Наиболее распространенной является комбинация масла красного или черного перца с лопуховым маслом. В тандеме они приносят огромную пользу для волос.

Избавляют от перхоти.
Оздоравливают кожу головы.
Справляются с проблемой секущихся кончиков.
Дарят локонам сияющий блеск.
Устраняют тусклость.
Предупреждают и сокращают потерю волосков.
Убирают кожный зуд головы.
Восстанавливают повреждённые волоски.

Как правильно использовать перцовое масло для волос

Наносить смесь только на чистые и высушенные локоны.
Раз в неделю перед тем, как сделать маску из масла и перца, рекомендуется проводить пилинг эпидермиса головы с использованием морской соли. Это усиливают кровоток головы и применение средства будет более эффективным.
Для получения заметного эффекта, процедуры необходимо проводить на регулярной основе.
Наносить масло на голову необходимо массажными движениями и точно также смывать его.
В качестве ополаскивателя можно применять ромашковые настои, а также из лопуха и календулы.

Противопоказания для использования

При всех имеющихся доказательствах о пользе этого средства для волос, для его применения имеются и некоторые противопоказания.

Аллергия на перец.
Индивидуальная непереносимость составляющих средства.
Непереносимость жжения.

Отзывы

Масло для волос Fito-косметик «Перцовое» для активного роста и оздоровления

Среди множества достоинств средства представительницы прекрасного пола выделяют его природный состав. Упаковано оно в одноразовый пакетик, но многие делят его содержимое на несколько раз в зависимости от длины и густоты волос. Средство богато питательными веществами не только натуральных масел и перца, но и пихты, хмеля и гвоздики.

После тестирования этого состава, женщинами отмечается форсирование роста волос и изменение их внешнего вида в лучшую сторону, появление здорового блеска.

Масло репейное с перцем и эфирными маслами от Mirrola

Средство приобреталось для усиления луковиц, устранении зуда и стимулировании роста волос. Для лучшего смывания и дополнительной эффективности от использования, масло рекомендуется наносить с яичным желтком. Действие состава становится ощутимым через 5 минут после нанесения, чувствуется термическое воздействие красного перца.

После использования масла в течении месяца три раза в неделю отмечается укрепление волос, появление шелковистости, улучшение кожи головы.

Репейное масло с красным перцем Алтайский букет

В состав средства входит масляный экстракт корня лопуха и экстракт перца. По информации производителя все компоненты — это растительное сырьё из Алтая. К тому же, радует удобный флакон и граммовка. При низкой стоимости, эффективность средства оказывается потрясающей.

После курса из двенадцати процедур они стали меньше выпадать, меньше жирниться и ускорились в росте.

Горячее кокосовое масло для волос с черным перцем и гибискусом

После использования средства волосы выглядят более здоровыми и крепкими. Средство втирается в кожу головы, а перед использованием его рекомендовано нагревать на водяной бане.

Изготовитель предупреждает, что перед использованием на светлых окрашенных или мелированных волосах, состав необходимо опробовать на отдельной прядке, поскольку, входящий в рецептуру гибискус может изменить цвет.

В состав домашних масок для волос помимо перцового масляного микса могут входить и другие полезные ингредиенты. Пропорциональность некоторых из них можно менять по своему желанию. Однако, необходимо помнить, что перцового экстракта должно быть всегда меньше, чем других компонентов.

Подробнее смотрите далее.

Рецепт своими руками

Для приготовления перцового масла необходимо взять перцовую настойку (из порошка красного перца и водки) и масло (репейное, касторку, оливковое, льняное, миндальное).

Для активизации роста волос

Ингредиенты: репейное перцовое масло – 100мл, вода – 50мл.

Все компоненты тщательно перемешиваются до образования однородного состава. Средство втирается в прикорневую зону, стараясь не задевать локоны. После нанесения средства на голову, её покрывают ПЭ пакетом, а сверху обматывают полотенцем.

Время воздействия может быть от 10 до 30 минут.

С шампунем

Ингредиенты: любое перцовое масло – 3 большие ложки, шампунь (обычный, который вам подходит) – 2 больших ложки.

Все ингредиенты необходимо перемешать, полученный состав нанести равномерно по всем прядям и оставить на 60 минут.

По окончанию этого периода состав необходимо смыть теплой водой.

Для роста

Ингредиенты: комбинированное перцовое масло с репейным маслом и касторкой – 2 больших ложки (1 часть перцовой настойки, ½ часть касторки, ½ часть репейного масла)

Вышеуказанные компоненты перемешиваются и аккуратно наносятся на голову. Поверх маски необходимо надеть косметическую шапку и полотенце.

Время работы маски – до 1-го часа.

От выпадения

Ингредиенты: любое перцовое масло (репейное, перцовое, оливковое) – 2 больших ложки, коньяк (водка, спирт) – 20мл, желток одного яйца, сок лимона – 2 маленькие ложки.

Все ингредиенты тщательно перемещать и нанести на волосы. Для умножения эффекта маску необходимо спрятать под полотенце.

Средство следует смыть через полчаса.

15 лучших шампуней от перхоти в 2020 году от зуда и шелушения кожи головы

Выбор лучшего шампуня от перхоти традиционно вызывает в воображении видение лечебных зельев для морщин, которые не так уж интересно покупать или использовать. Перхоть может раздражать даже в самых легких случаях, но особенно когда ее симптомы включают зуд, сухость кожи головы, раздражение и хлопья, которые, кажется, покрывают каждый предмет темной одежды, которая у вас есть.

Согласно Карлосу Уэсли, доктору медицины, косметическому хирургу и специалисту по выпадению волос из Нью-Йорка, перхоть возникает из-за «перепроизводства масла» или «увеличения количества нормальных дрожжевых грибков» на коже головы.Масло блокирует отшелушивание омертвевших клеток кожи, и, в свою очередь, эти клетки становятся более заметными — отсюда и чешуйки. Хорошей новостью является то, что вы обычно можете лечить перхоть — или себорейный дерматит, как его называют с научной точки зрения — с помощью безрецептурных препаратов. Специально разработанный шампунь помогает избавиться от знакомых симптомов шелушения и зуда. А благодаря инновациям брендов средств по уходу за волосами эти формулы теперь намного привлекательнее, чем в прошлом.

Если вы ищете формулу без излишеств или хотите что-то с дополнительными преимуществами для волос, есть несколько основных ингредиентов, на которые стоит обратить внимание.Уэсли рекомендует начинать с противогрибковых средств, таких как пиритион цинка или дисульфид селена, которые должны подействовать в течение нескольких недель после использования. В долгосрочной перспективе вы также можете выбрать медленный и постоянный подход с противовоспалительными и антимикробными растительными средствами, такими как масло розмарина или лаванды. Салициловая кислота (та же, что используется в вашем очищающем от пятен умывании) также одобрена дермами для регулирования обновления клеток кожи головы.

Какой бы вариант вы ни выбрали, вы, вероятно, захотите, чтобы формула работала как можно быстрее и заметнее.Имея это в виду, мы изучили онлайн-обзоры, чтобы выяснить, какие из лучших шампуней от перхоти дают обещанные результаты. Ниже представлены 15 подборок, которыми стоит запастись.

Все продукты, представленные на Glamour, выбираются нашими редакторами независимо. Однако, когда вы покупаете что-либо через наши розничные ссылки, мы можем получать партнерскую комиссию.

Репейное масло с хвощем 100мл — Волосы — Бесплатная доставка

Justmylook предлагает бесплатную доставку для всех заказов в Великобритании через Royal Mail 48 и Royal Mail 48 Tracked.У нас есть множество доступных услуг express .

Обновление доставки: Обратите внимание, что в настоящее время мы наблюдаем более высокий уровень заказов, чем обычно, и прилагаем все усилия, чтобы отправить заказы как можно скорее. Нехватка рабочей силы в сочетании с задержками с нашими курьерами несколько увеличивает время выполнения заказа.

Мы предлагаем ориентировочную дату доставки при оформлении заказа. Убедительно просим клиентов выделить немного больше времени для доставки заказов в это напряженное время.

Royal Mail 48 Отслеживается: Заказы обычно отправляются в течение 2-3 дней. Доставка обычно занимает 4-6 дней.

Royal Mail 24, Royal Mail Special Delivery и DPD: Заказы, размещенные до 12:00, обычно отправляются в тот же день с понедельника по пятницу. Заказы после этого порога будут отправлены на следующий рабочий день.

Экспресс-доставка

Экспресс-доставка доступна всего по цене от 2,95 фунтов стерлингов. Мы отправляем наши экспресс-заказы тремя различными способами доставки.Доступны следующие услуги: Royal Mail 24 Tracked (не гарантировано), DPD (гарантировано) или Royal Mail Special Delivery до 13:00 (гарантировано). Специальная доставка Royal Mail — это наша единственная гарантированная субботняя услуга.

Служба экспресс-доставки

DPD включает в себя отслеживание от двери до двери, SMS-оповещения и часовой интервал для доставки, чтобы вы точно знали, когда ожидать своих косметических подарков!

Международная доставка

Республика Ирландия — бесплатно отслеживаемая доставка для заказов на сумму более 25 фунтов стерлингов / 30 евро.3,50 фунта стерлингов для заказов до 25 фунтов стерлингов / 30 евро. Доставка обычно занимает 4-6 дней после отправки. Обратите внимание, что мы предоплачиваем все соответствующие таможенные сборы от имени наших клиентов.

Экологичная упаковка

Мы с гордостью сообщаем, что наши почтовые пакеты изготовлены из полностью переработанного полиэтилена, а наша пузырчатая пленка на 100% биоразлагаема.

Justmylook не несет ответственности за задержки транспортировки или обстоятельства, не зависящие от нас, вызывающие задержку доставки.Доставка будет по адресу, указанному в вашем заказе. Мы доставим товар только по адресу, указанному при оформлении заказа. Если по почтовому адресу, указанному во время доставки, никого нет, вам будет оставлено уведомление, или Royal Mail может доставить его соседу. Получатели могут отказаться от доставки соседу, а также могут назначить конкретного соседа, если захотят. Подробную информацию о том, как это сделать, можно найти здесь: https://www.royalmail.com/personal/receiving-mail/delivery-to-neighbour

Коллекции запрещены.

Опасные материалы (HAZMAT)

Обратите внимание, что в настоящее время Royal Mail классифицирует лаки для ногтей, легковоспламеняющиеся жидкости и аэрозоли как «опасные материалы» и принимает только ограниченное количество из них на посылку.

Если ваша покупка превышает указанные ниже ограничения, она будет доставлена другим способом; Hermes, если выбрана стандартная доставка, и DPD, если выбрана экспресс-доставка.

Лимиты:

4x лака для ногтей
2x аэрозоля
Аэрозоли свыше 500 мл
Перевозка легковоспламеняющихся жидкостей через Royal Mail невозможна.

Действие пептидов, выделенных из корня лопуха, против угрей — предварительные исследования и пилотные испытания

Molecules.2020 Май; 25 (9): 2027.

Malgorzata Miazga-Karska

¹ Кафедра биохимии и биотехнологии, Медицинский университет Люблина, Chodzki 1, 20-832 Люблин, Польша; [email protected]

Катаржина Михалак

² Отделение эпизоотологии, Клиника инфекционных заболеваний, Университет естественных наук, Глебока 30, 20-612 Люблин, Польша; [email protected]

Гражина Гинальска

¹ Кафедра биохимии и биотехнологии, Медицинский университет Люблина, Chodzki 1, 20-832 Люблин, Польша; [email protected]

Роберто Фабиани, академический редактор, Элиана Перейра, академический редактор, и Нэнси Д. Тернер, академический редактор

¹ Кафедра биохимии и биотехнологии, Медицинский университет Люблина, Ходски 1, 20-832 Люблин, Польша; [email protected] ² Отделение эпизоотологии, Клиника инфекционных болезней, Университет естественных наук, Глебока 30, 20-612 Люблин, Польша; [email protected]

Поступила в редакцию 4 апреля 2020 г .; Принято 22 апреля 2020 г.

Лицензиат MDPI, Базель, Швейцария.Эта статья — статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/). Эта статья цитировалась другими статьями в PMC. .

Abstract

Целью данной работы было изучение антибактериального, антибиотикопленочного и антиоксидантного потенциальных эффектов низкомолекулярных (LMW) пептидов (Br-p), выделенных из корней лопуха ( Arctium lappa L. ). Мы провели предварительное исследование, чтобы исключить или подтвердить антибиотическую активность фракции низкомолекулярных пептидов этого растения.Br-p выделяли с использованием гель-фильтрации и отсекающей мембраны 10 кДа. Полученные пептиды идентифицировали с помощью MALDI TOF / TOF. Антибактериальную активность тестировали против штаммов акне с помощью диффузионных тестов, MIC и MBC. Проверяли цитотоксичность Br-p для фибробластов и определяли значение индекса селективности (SI). Фракция 46 пептидов Br-p, выделенных из корня лопуха с молекулярной массой ниже 5000 Да и теоретическим pI (изоэлектрическая точка) 3,67–11,83, показала узкий спектр активности против грамположительных штаммов бактерий акне.Одним из пептидов Br-p, оцениваемых на MALDI RapidDeNovo, был катионный пептид LRCDYGRFFASKSLYDPLKKRR. Он был аналогичен белку A. lappa и теоретически соответствовал пептиду с антибиотической природой. Br-p не проявлял токсичности для фибробластов в исследуемой концентрации до 10 мг / мл, получая CC ₅₀ 10 мг / мл. Значение SI для протестированных штаммов Propionibacterium варьировалось от 160 до 320. Наконец, активная повязка на основе хитозана / альгината / генипина была приготовлена с использованием сублимационной сушки.Сформированную повязку оценивали на ее противоугревую активность. Резюмируем: предварительные биологические исследования подтвердили противоугревые свойства выделенной пептидной фракции корня лопуха и указали на возможность ее использования для создания активной повязки на коже.

Ключевые слова: Антибактериальные пептиды, кожа от угрей, полисахаридная повязка, Arctium lappa L.

1. Введение

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) предупреждает об эпидемиологических угрозах.Сегодня это коронавирус, завтра лекарственно-устойчивые бактерии могут вызвать большое количество осложнений и высокую смертность. Нерациональная антибактериальная терапия приводит к устойчивости к микробам, то есть способности микроорганизмов (например, бактерий, вирусов и некоторых паразитов) препятствовать противомикробным препаратам противостоять им. В результате стандартные методы лечения становятся неэффективными, а инфекции сохраняются и могут распространяться на других. ВОЗ сообщает, что неправильное употребление антибиотиков подвергает всех нас опасности, и мир движется к эре препенициллина.Однако, если эффективные противоинфекционные препараты закончатся, большинство инвазивных медицинских процедур, от удаления зуба до сложной хирургии, снова будут подвергаться высокому риску смертельной инфекции [1].

Propionibacterium acnes — самый важный воспалительный фактор кожи. Лечение угревой сыпи на протяжении нескольких лет — сложная и сложная проблема не только для дерматологов. Это также заметно хирургам; у пациентов с прыщами на плечах и спине, груди или бедрах он может вызвать послеоперационные инфекции и продлить заживление из-за присутствия Propionibacterium acnes.В таких случаях рекомендуется бактерицидное лечение до и после операции. В большинстве европейских стран устойчивость Propionibacterium acne к антибиотикам в основном относится к макролидам, клиндамицину и эритромицину. Перед началом противоугревой терапии частота такой устойчивости составляет от 51% (Венгрия) до 94% (Испания) [2]. Поэтому целенаправленно создание новых стратегий лечения путем поиска новых препаратов на основе природных антибактериальных пептидов, которые могут быть альтернативой классическим антибиотикам и предотвратить появление резистентности у бактерий.

Противомикробные пептиды (АМП) являются частью иммунной системы растений и животных. База данных AMP указывает, что среди всех 3070 зарегистрированных, 75% являются AMP животного происхождения (позвоночные, беспозвоночные), 13% растительные, 8,43% бактериальные, 0,47% грибковые, 0,23% простейшие и 1,58% синтезированные de novo [3].

АМП представляют собой тип катионных пептидов, которые включают все олиго- и полипептиды (пептиды, возникающие в результате отделения от более крупных белков), которые убивают или подавляют рост микробов [4].Заслов М. был первым, кто заметил, что травмированные лягушки выделяют антибактериальные вещества, которые он назвал магайнинами. Механизм их действия заключался в прикреплении молекул магаинина к микроорганизмам и разрушении их клеточных мембран [5]. Проницаемость мембраны является основным механизмом описания действия антимикробных пептидов [6,7,8]. Большинство антибактериальных пептидов заряжены положительно и имеют амфифильный характер. Эти катионные AMP могут взаимодействовать с отрицательно заряженными мембранами бактериальных клеток, вызывая изменения электрохимического потенциала и проникновение молекул.Это влияет на разрушение клеточных мембран и в конечном итоге вызывает гибель клеток [6,7,8,9]. Терапевтическое использование AMP заключается в том, что они селективны по отношению к типу клеточной мембраны. Оказывается, они эффективно нарушают целостность прокариотических мембран, в то время как они не вызывают повреждения эукариотических мембран. Такая селективность возможна из-за различий в химическом составе между такими мембранами. Вкратце, мембраны эукариотических клеток человека содержат до 50% холестерина, тогда как мембраны грибов вместо этого содержат эргостерин, а бактерии вообще не содержат стерола [6].Характерной особенностью растительных пептидов является высокое содержание остатков цистеина (растительных тионинов и дефенсинов) [10], которые создают от двух до шести дисульфидных связей, влияющих на химическую стойкость и устойчивость к протеолитической деградации [4]. В настоящее время из корней [4], листьев [11,12,13], цветов [14] и семян [15,16,17,18,19] выделено несколько семейств антимикробных пептидов самых разных видов растений. ].

Наша работа была направлена на проведение предварительных исследований по выделению низкомолекулярных пептидов из корней лопуха ( Arctium lappa L.) и оценить уровень их антибактериальной активности в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. Противомикробная активность растительных пептидов была замечена некоторыми исследовательскими группами [3,4,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19], но нет сообщений о пептидах, выделенных из лопуха. Народная и традиционная медицина, особенно в Азии, Индии и Европе, указывает на полезное употребление свежих, сушеных или маринованных корней и стеблей этого растения. Масло из корня лопуха чаще всего используется в медицинских целях, поскольку оно содержит белки, жир, сахар, инулин, фитостерины, эфирные масла, гликозиды, сапонины, серу, фосфор и аскорбиновую кислоту [20].Масло обладает антибактериальными [21,22], противогрибковыми [23] и противовоспалительными свойствами [24,25], а недавно было показано, что оно обладает антидиабетическим действием [26]. Масляный препарат можно использовать для лечения фурункулов, прыщей, перхоти и других себорейных заболеваний. Что касается полезных свойств масляной фракции корня лопуха, наше исследование было направлено на получение водной пептидной фракции из лопуха с последующей оценкой ее биологической активности.

2. Результаты

Образцы корней лопуха, выделенные с помощью ультразвука и процедуры высаливания, фракционировали с помощью гель-фильтрации Sephadex G-50 (Материалы и методы, раздел 4.1.) Полученные фракции оценивали по количеству белка и антибактериальным свойствам (диффузионный тест в твердой среде). Активные фракции объединяли и получали пептидную фракцию, названную Br-f (количество белка для фракции Br-f составляло 354 мкг / мл). Br-f был первоначально протестирован на антибактериальную активность (,), а оставшаяся часть Br-f была дополнительно подвергнута ультрафильтрации в Amicon (отсечка 10 кДа) с последующей сушкой вымораживанием для получения окончательных образцов пептида Br-p (содержание белка составляла 51 мкг / мл).Оказывается, антимикробная активность повышалась с этапами очистки, во время которых уровень белка снижался. Данные в и показывают, что оба образца пептидов корня лопуха (Br-f и Br-p) не подавляли рост грамотрицательных бактерий. Напротив, оба образца пептида оказали заметное ингибирующее действие на грамположительные бактерии: Br-f и очищенная пептидная фракция Br-p подавляли действия бактериальных штаммов, как аэробных, так и анаэробных. Однако фракция очищенного пептида Br-p работала почти в два раза сильнее, чем Br-f.Эти Br-f создавали зоны ингибирования роста грамположительных бактерий в диапазоне 8,5–15 мм, в то время как пептиды Br-p демонстрировали ингибирование роста тестируемых штаммов в диапазоне 19,5–27,5 мм ().

Зоны ингибирования роста бактерий как антибактериальная активность образцов лопуха.

Таблица 1

Антибактериальная активность (MIC, соотношение MBC / MIC) и цитотоксичность (CC ₅₀ как активность фибробластов и индекс селективности SI), вызванные образцами корня лопуха.

Образец	S.aureus ATCC 25923				S. epidermidis ATCC 12228				P. acnes PCM 2334				P. acnes PCM 2400				E. coli ATCC 25992				P. aeruginosa P. aeruginosa
Образец	MIC	MBC MIC	CC ₅₀	SI	MIC	MBC MIC	CC ₅₀	SI	MIC		MBC	MIC	MBC SI	MIC	MBC MIC	CC ₅₀	SI	MIC	MBC MIC	CC ₅₀	SI	MIC		MBC	MIC	MBC	SI
Бр-ф	500	8	> 10	> 20	500	8	> 10	> 20	250	4	> 10	> 40		500 > 10	> 20	> 2000	—	> 10	—	> 2000	—	> 10	—
Бр-п	250	4	> 10	> 40	250	4	> 10	> 40	31.25	2	> 10	> 320	62,5	2	> 10	> 160	> 2000	—	> 10	—		> 2000 —	—

Приведенные выше результаты были подтверждены оценкой минимальной ингибирующей концентрации (МИК). Данные указывают на то, что наиболее благоприятные низкие значения концентрации МИК были получены с образцами пептида Br-p в первую очередь против штаммов акне P.acnes PCM 2334 (MIC 31,25 мкг / мл) и P. acnes PCM 2400 (MIC 62,5 мкг / мл). Более высокие значения МИК были определены против других грамположительных бактерий Staphylococcus aureus и S. epidermidis (МИК 250 и 500 мкг / мл соответственно). Однако для достижения таких значений МИК для S. aureus и S. epidermidis требовалась вдвое более высокая концентрация Br-f, а для достижения МИК для обоих видов P. acnes — до восьми раз выше. В анализе MIC оба образца пептида лопуха не проявляли активности в отношении грамотрицательных штаммов.

Другой тест MBC / MIC подтвердил, что бактерицидная или бактериостатическая природа образцов лопуха зависит от стадии их очистки (). Пептидная фракция Br-p была бактерицидной против всех испытанных грамположительных штаммов, как аэробных, так и анаэробных. Однако Br-f, фракционированный с использованием гель-фильтрации SephadexG-50, имел только бактериостатический характер по отношению к этим грамположительным штаммам. Из-за низкой активности Br-p и Br-f против грамотрицательных штаммов невозможно определить значение MBC / MIC.В последующих экспериментах использовали образец пептида Br-p из-за его хорошей антибактериальной активности.

На следующем этапе исследования МС-спектр смеси пептидов оценивали с помощью MALDI-TOF. Полученный спектр был сглажен, и список пиков для отношения сигнал / шум был сформирован в цифровом виде (Рисунок S1).

MALDI-TOF спектр смеси образцов пептидов ( a ), расширение диапазона, показывающее ионы для фрагментации MS / MS ( b ).

Полученные данные подтвердили, что образец Br-p состоял из 46 пептидов с молекулярной массой менее 5000 Да.Загружали 10 основных пиков (соответствующих пептидам) с отношением сигнал / шум более 20 и подвергали секвенированию BioTools RapiDeNovo. Отклик параметра сигнал / шум на интенсивность пика соответствует количеству определенных пептидов. Эти пики были выбраны для анализа в связи с предположением, что они оказывают наибольшее влияние на антибактериальное действие. Пептидные последовательности, полученные из образца корня лопуха Br-p, дополнительно анализировали с использованием базы гомологии Basic Local Alignment Search Tool (BLAST).Это основание позволило сопоставить пептиды, присутствующие в образце Br-p (в области гомологии), с аналогичными пептидами и белками, обнаруженными в семействе Asteraceae. Выбранные пептиды с заданной аминокислотной последовательностью были включены в ферментные (оксигеназы, дегидрогеназы, трансферазы) или растительные иммунные белки из семейства сложноцветных. Они указаны в. В случае фрагмента последовательности NWFKPG есть предположения о белках, из которых они могут происходить. Кроме того, для 3038 m / z были отобраны два равновероятных фрагмента последовательности (FSRERD, NKFSRE).В случае антимикробных пептидов важно было определить значение pI. В нашей смеси из 46 пептидов лопуха было выделено десять, встречающихся в наибольшем количестве. На основании данных, содержащихся в, можно сделать вывод, что смесь пептидов Br-p содержала пептиды с pI в диапазоне 3,67–11,83. Среди них был катионный пептид LRCDYGRFFASKSLYDPLKKRR с теоретически ингибирующей активностью в отношении бактериальной пермеазы и с pI 10,18. Таким образом, из-за типа активности и катионной природы пептид может отвечать за активность антибиотика.

Таблица 2

Фрагменты последовательности пептида Br-p, назначенные при секвенировании RapidDeNovo; теоретический характер деятельности и ПИ.

902 анн-902 (связывание) 9002 AW260
AW2 дегидрогеназа. консервативный сайт-содержащий белок
( Cynara cardunculus var. scolymus ) 7 ( Arctium lappa ) 1-подобный ( Lactuca sativa )

Фрагмент последовательности, идентифицированный с помощью Rapid de Novo	m / z	S / N *	Белки семейства сложноцветных Возможный источник пептидов **	Вероятный пептид	Последовательность		Теоретическая pI ****
VQGR	2470	24.2	фотосистема I P700 апопротеин хлорофилла a A1 ( Arctium lappa )	QPRALSIVQGRAVGVTHYLLGGIA	Антиоксидант: YLL Активация убиквитин-опосредованного протеолиза: 15 RA 10,84
WHM	2696	388,2	рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилаза / оксигеназа большая субъединица. частичный ( Arctium eriophorum )	FTQDWVSLPGVLGHPWGNAWHMPA	Антиоксидант: PWG, AW, WG	5.97
GAAV	2700	1180,0	рибулоза 1-5 бисфосфаткарбоксилаза оксигеназа. частичный ( Arctium lappa )	QPGVPPEEAGAAVAAESSTGTWTTVWT	Антиоксидант: TW, VW, GAA, GTW	3,67
WFANH
WFANH	YDWFANHNLLWPSLSCRWGPLE	Антиоксидант: RW, LW	5.32
TLAW	2718	55,9	Фотосистема I P700 хлорофилл а апопротеин A2 ( Arctium lappa )	WRGYWQELIETLAWAHERTPLA			AWAHERTPLA		AWAHERTPLA	AWA	2720	35,1	фруктан: фруктан-1-фруктозилтрансфераза ( Arctium lappa )	LRCDYGRFFASKSLYDPLKKRR	Иммуномодулирующий: YG Ligabit YG Ligabit, Ligma, антиоксидант , 10.18
STAG	2737	36,4	NADH-дегидрогеназа субъединица F. частичная ( Arctium lappa )	SWLYSPIFAIIAWSTAGLTAFYMC			Антиоксидант		IQCLGGNGYM NEYPTGRYLR DAKL	Антиоксидант: QCL Ингибитор альфа-глюкозидазы: YP	8.15
WEYPT			транспозаза. MuDR. Белок транспозазного домена MULE ( Artemisia annua )	AEAVNFVGEYHEWEYPTHIKPII	Антиоксидант: KP Ингибитор альфа-глюкозидазы: YP, EA	4,87 90FF268	4,87 90FF268 902AD	4,87 90FF268
LWLGPFMADIGAQTPFFYIFRER			Антиоксидант: LW	6.07
NWFKPG	3034	163,9	Кандидат в белки устойчивости. частичный ( Lactuca sativa )	TLLVLDDVDHIDQLEALAGDLNWFKPG	Антиоксидант: KP Ингибитор альфа-глюкозидазы: EA Активирующий убиквитин-опосредованный протеолиз	3, как	3, протеолиз 9016 частичный ( Artemisia tridentata )	DVNHKDQLEALAGNCNWFKP GSRIIIT	Антиоксидант: KD, KP, NHK Ингибитор альфа-глюкозидазы: EA Активирующий убиквитизин-опосредованный протеолиз1675
			N-подобный белок устойчивости к ВТМ ( Helianthus annuus )	DDVDHIDQLEALAGEPNWFKPGSRVII	Активация опосредованного убиквитином протеолиза: LA 9002	4,23	SITSSNSRNEEFSRERDSES GVFTPKT	Гиполипидемический: EF Ингибитор CaMPDE: EF	5.00
			Белок, содержащий богатые лейцином повторы ( Artemisia annua )	VIGVSVGLVFIGGVMFLRHWFSRERDA	Иммуностимулирующий: GVM Антиоксидант16 RHW 9002 9,49
NKFSRE	Пыльцевидная киназа 4 ( Helianthus annuus )	FKRLRRLRSIFLTANKFSREIPTDA	Ингибитор CaMPDE: KF	11,83

Следующим шагом было определение силы улавливания свободных радикалов Br-p в анализе DPPH.Такая активность образца пептида была бы желательна при приготовлении препарата против угрей. В эксперименте были использованы анализы улавливания радикалов для оценки активности Br-p и глутатиона (GSH) в качестве положительного контроля (). Анализ ингибирования свободных радикалов DPPH новой пептидной фракции Br-p выявил сильную антиоксидантную активность, наблюдаемую на графике эффективной концентрации (50–900 мкг / мл) (). Было обнаружено, что значение IC ₅₀ для Br-p для ингибирования DPPH составило 483.9 мкг / мл. Результаты были сопоставимы с результатами для эталонного пептида GSH (протестировано при 50–900 мкг / мл) и с IC ₅₀ 286,64 мкг / мл. При анализе последовательности пептидов, присутствующих в образце, можно увидеть, что они содержат фрагменты пептидов, которые считаются антиоксидантами, что может привести к высоким антиоксидантным свойствам. Кроме того, в процессе выделения существует возможность неспецифического разрыва аминокислотных цепей, что приводит к появлению небольших ди- или трипептидов, которые не наблюдаются в спектре MALDI.Это может означать, что в образце Br-p гораздо больше пептидных фрагментов с антиоксидантной активностью.

Активность Br-p по улавливанию 2,2-дифенил-1-пикрилгидразильных радикалов по сравнению со стандартным GSH.

Исследуемый образец пептидов Br-p оценивали на его цитотоксическую активность по отношению к линии клеток фибробластов кожи человека (BJ) после 24 часов инкубации. На основании результатов анализа МТТ была определена половина максимальной цитотоксической концентрации (CC ₅₀) и суммирована в.

График жизнеспособности человеческих фибробластов (BJ) в зависимости от концентрации Br-p по сравнению с контролем; * статистически значимые результаты по сравнению с контролем.

Данные показывают, что пептиды Br-p не проявляют цитотоксичности в отношении клеток BJ во всем протестированном диапазоне концентраций (0,0097–10 мг / мл). Жизнеспособность фибробластов поддерживалась в испытанном диапазоне концентраций Br-p на высоком уровне, превышающем 85%. Этот результат означает, что значения CC ₅₀ пептидов Br-p были выше 10 мг / мл.Таким образом, для определения биосовместимости и селективности экстрактов значение CC ₅₀ для Br-p было принято равным 10 мг / мл (). Для оценки терапевтической безопасности и эффективности образца пептида Br-p in vitro определяли индекс селективности (SI). Индекс SI определяется как отношение цитотоксической активности (CC ₅₀) к антибактериальной активности (MIC). Высокие значения индекса селективности указывают на то, что исследуемый образец может быть более эффективным против штаммов бактерий и более безопасным для эукариотических клеток.Таким образом, значения SI ниже 10 указывают на отсутствие терапевтической безопасности, а значения SI выше 10 позволяют проводить оценку in vivo [27]. Чрезвычайно терапевтически важно, чтобы Br-p проявлял благоприятный и очень безопасный терапевтический потенциал против штаммов акне P. acnes PCM 2334 и P. acnes PCM 2400 со значениями SI безопасности 320 и 160 соответственно. Однако по отношению к тестируемым грамотрицательным бактериям ( E. coli и P. aeruginosa ) Br-p не соответствовал требованиям безопасности.

Последним этапом исследований стало производство типовой функциональной повязки против угрей, модифицированной фракцией пептида Br-p из корня лопуха. Перевязочный материал был создан из хитозана и альгината, сшитого генипином. Полученный после сублимационной сушки лист гидрогеля, состоящий из полисахаридов, представлял собой однородную тонкую пену, стойкую к скалыванию или растрескиванию. Контрольные немодифицированные повязки, модифицированные пептидом Br-p, погружали в среду с планктонной формой штаммов акне.Сравнивали, могут ли такие планктонные формы бактерий создавать колонии, приводящие к образованию биопленок в одинаковой степени на контрольных и модифицированных материалах. Проведенный тест, отображаемый в конфокальном лазерном сканирующем микроскопе, показал положительные эффекты модификации Br-p (). А именно, изображения конфокального лазерного сканирующего микроскопа (CLSM) показали биопленок P. acnes или S. aureus на поверхности повязки с жизнеспособными и мертвыми колониями (зеленая и желто-красная флуоресценция, соответственно).Группа контрольных повязок продемонстрировала жизнеспособность бактерий P. acnes или S. aureus , которые сформировали архитектуру зеленой флуоресцентной биопленки, что указывает на жизнеспособность бактерий в течение периода оценки. При этом на испытанных повязках были видны только красные колонии мертвых бактерий. На изображениях показано более слабое или отсутствие прилипания тестируемых бактерий к повязке, модифицированной Br-p, по сравнению с немодифицированным контролем ().

Изображения конфокального лазерного сканирующего микроскопа (CLSM), показывающие образование биопленок на немодифицированных и модифицированных Br-p повязках, определенные в конфокальном микроскопе; увеличение 400 ×; масштабная линейка = 40 мкм.

3. Обсуждение

Вульгарные угри — хроническое заболевание сальных желез волос, сопровождающееся себореей. Это не инфекционное заболевание, но количество пациентов увеличивается на Propionibacterium acnes [28]. Группа Акерманна представила относительную численность видов Propionibacterium в различных областях кожи, доказав, что эти бактерии присутствуют не только в области лица, что приводит не только к косметическим проблемам, но и затрудняет проведение хирургических процедур на большей площади [28 ].

Корни лопуха ( Arctium lappa L. ) широко используются в качестве лечебных трав из-за их ценного фитохимического состава. Pereira et al. [29], Gentil et al. [30] и Pirvu et al. [31] показали антибактериальную активность в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий сырых экстрактов лопуха, а Knott et al. и Jingvi et al. [32,33] доказали улучшение состояния кожи при употреблении экстракта лопуха. Одной из молекул в корнях лопуха, ответственной за антибактериальные свойства, могут быть пептиды, потому что каждый организм (от микроорганизмов до млекопитающих) имеет врожденную систему защиты, которая определяется, среди прочего, наличием антимикробных пептидов (АМП) [34].Поэтому в нашей работе было желательно очистить неочищенный экстракт корня лопуха для оценки биологической активности раствора пептида. Присутствие 46 фракций пептидов с молекулярной массой ниже 5000 в Da Br-p определяли с помощью MALDI TOF. 10 основных пиков подвергали секвенированию BioTools RapidDeNovo (). Определенные теоретические значения pI подтвердили присутствие некоторых катионных пептидов с предпочтением антибактериальной активности со значениями pI 11,83, 10,18, 9.49 и 8.15. Исходя из этого, мы можем теоретически предположить, что пептид LRCDYGRFFASKSLYDPLKKRR с pI, равным 10,18, и аминокислотным фрагментом KK, с активностью, указанной как бактериальный лиганд пермеазы, может быть ответственным за активность антибиотика. В механизме трансдукции энергии в бактериальных мембранах, объемная фаза, трансмембранный электрохимический ионный градиент является важной проблемой и касается, например, вторичного активного транспорта, окислительного фосфорилирования и вращения мотора жгутиков бактерий.Транспорт включает субстрат-специфические мембранные белки, которые катализируют уравновешивание или восходящую транслокацию растворенного вещества через мембрану. Эти белки-переносчики называют переносчиками, котранспортерами, симпортерами или пермеазами. Таким образом, пермеазы участвуют в активном переносе источников энергии, например, глюкозы, фруктозы, различных сахаров и сахарных спиртов. Таким образом, пермеазы, обеспечивая бактериальную клетку источником энергии, могут быть мишенью молекулярного ингибирования роста бактерий [35].

Оба образца корня лопуха (Br-f, Br-p), полученные на последующих стадиях очистки, были оценены на антимикробный характер.Данные по подавлению роста бактерий показывают, что образцы полипептида корня лопуха обладают способностью подавлять рост бактерий акне (). Результаты показывают, что антибактериальная природа образцов возрастает с увеличением количества стадий очистки, поскольку очищенный с помощью Br-p образец был по крайней мере в два раза сильнее, чем Br-f. Значение MIC подтвердило, что Br-p обладает более сильными антибактериальными свойствами, чем смесь неочищенных полипептидов Br-f (). Br-p обладал бактерицидной природой против всех грамположительных штаммов, тогда как Br-f был активен только против анаэробных грамположительных штаммов.Исследуемые препараты из корней лопуха не подавляли активность грамотрицательных штаммов.

Узкий спектр, продемонстрированный образцами корня лопуха, ограниченный только грамположительными бактериями, может быть полезным. Это предполагает, что химиотерапия с одним лекарством может использоваться для борьбы с акне, что является предпочтительным для идентифицированного патогена, сводит к минимуму воздействие на физиологическую флору организма и снижает побочные эффекты и токсичность. Наши тесты также показали, что образец Br-p в кислой среде pH (бульон BHI и агар BHI pH 6.0) обладали антибактериальной активностью. Это многообещающий результат, который терапевтически полезен для косметических составов, требующих кислого pH. Кроме того, антибактериальные пептиды, активные в кислой среде, обладают защитным действием от бактериальных инфекций (кожа, полость рта, мочевыводящие пути и влагалище обладают кислым pH). Корейская группа [36] отметила, что высокие антибактериальные свойства пептидов Nod1 и Nod2, выделенных из Nordotis Disc в кислой среде, могут быть полезны, когда эти пептиды применяются в качестве терапии кожи при pH около 5.5.

Интересны клинически важные результаты измерения значения индекса селективности SI. Высокие значения индекса селективности указывают на то, что тестируемый образец может быть более эффективным против штаммов бактерий и более безопасным для эукариотических клеток. Таким образом, значения SI ниже 10 определяют отсутствие терапевтической безопасности, а значения SI выше 10 позволяют проводить оценку in vivo [27]. Значения SI Br-p для грамположительных штаммов составляли не менее 20 и даже по сравнению со штаммами акне имели чрезвычайно благоприятную селективность до 360.Низкая токсичность и хорошая антибактериальная активность обеспечивают безопасное значение терапевтического индекса, что позволяет предположить, что полученные очищенные пептиды корня лопуха могут быть многообещающими в качестве средства против угрей. Другие авторы также сообщают о благоприятных высоких значениях SI протестированных антимикробных пептидов (AMP) растений и возможности их применения в косметической, медицинской, пищевой или сельскохозяйственной промышленности [37,38,39,40,41].

С другой стороны, Kumar et al. [42] показали, что, хотя многие AMP прошли клинические испытания, не многие из них были одобрены Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) из-за проблем с токсичностью.Авторы указали стратегии улучшения активности и биосовместимости AMP, такие как химические модификации и использование систем доставки [41]. Другая грузино-американская группа ученых, работающая над синтезом AMP de novo, указала, что создание AMP с высокими терапевтическими индексами, низкой стоимостью синтеза, высокой устойчивостью к протеазам и высокой биодоступностью остается проблемой. Авторы разработали цифровой инструмент для прогнозирования алгоритмов AMP для создания AMP de novo, и были разработаны короткие пептиды с высокими терапевтическими индексами против грамотрицательных бактерий [43].

В связи с особенностями кожных заболеваний, связанных с угревой сыпью, противоугревые препараты также должны обладать антиоксидантным действием. Свободные радикалы опасны не только для нормальной кожи и кожи с акне, но они также могут вызывать множество различных заболеваний человека (сердечно-сосудистые заболевания, ревматоидный артрит, болезнь Альцгеймера и рак). По мнению некоторых авторов, независимо от используемого растворителя, неочищенный экстракт корня лопуха обладал значительной антиоксидантной активностью, как было определено с помощью DPPH; таким образом, неочищенный экстракт представляется многообещающим антиоксидантом [23,26,44,45,46].

В нашей работе был проведен анализ улавливания свободных радикалов DPPH для оценки антиоксидантной способности образцов пептида Br-p по отношению к свободному радикалу DPPH. Эксперимент показал сильную антиоксидантную активность (диапазон 50–900 мкг / мл) (). Было обнаружено, что значение IC ₅₀ Br-p для ингибирования DPPH составило 483,9 мкг / мл. Возможность улавливания свободных радикалов с помощью пептидов лопуха является многообещающей при применении в дерматологических косметических препаратах.

Важно отметить, что белки, полипептиды и пептиды также являются подходящими антиоксидантами, потому что они могут ингибировать окисление биомолекул через некоторые пути (включая инактивацию активных форм кислорода, улавливание свободных радикалов, хелатирование прооксидантных переходных металлов и восстановление гидропероксидов).Изменения в структуре третичного белка увеличивают доступность аминокислотных остатков, которые могут улавливать свободные радикалы и хелатировать прооксидантные металлы. Пептиды, а не белки, являются наиболее перспективными в качестве белковых антиоксидантов, и ряд исследований показал, что они обладают значительно более высокой активностью, чем белки с цельной, неповрежденной структурой [47, 48]. При заболеваниях с кератинолитической дисфункцией полезно бороться как со свободными радикалами, так и с бактериями, вызывающими эти заболевания, при отсутствии цитотоксичности.Такие комбинированные характеристики проявляют низкомолекулярные фракции пептидов корня лопуха.

На последнем этапе экспериментов была изготовлена антибактериальная и антиоксидантная активная повязка для кожи с угревой сыпью. Повязка, созданная de novo с полисахаридами (хитозаном и альгинатом натрия), была сшита генипином и модифицирована пептидами Br-p. Полученный таким образом гидрогель после сублимационной сушки имел структуру сухой пены, которая была проверена на адгезию бактериальной биопленки. Было обнаружено, что повязка, модифицированная Br-p, обладает полезными антибактериальными свойствами; он не показал адгезии или плохой адгезии тестируемых бактерий к поверхности по сравнению с немодифицированным контрольным материалом, о чем свидетельствуют изображения CLSM ().

Чтобы использовать разработанную модификацию активного пептида Br-p из корней лопуха для создания коммерческих повязок, в будущем необходимо проводить исследования на клинических штаммах бактерий, выделенных от дерматологических пациентов. Было бы целесообразно провести тесты in vivo, которые подтвердили бы или исключили эффективность антибактериальных повязок в профилактике и лечении периоперационных кожных инфекций акне.

4. Материалы и методы

4.1. Экстракция и фракционирование антибактериальных пептидов

Корни лопуха ( Arctium lappa L , Bardanae radix dry, Kawon, Gostyń, Poland) (100 г) растирали в ступке, и белки экстрагировали буфером (10 мМ Na _{). 2} HPO ₄, 15 мМ NaH ₂ PO ₄, 100 мМ KCl, пепсин 1.5 мг / г обезжиренного порошка, 2 мМ EDTA, pH 6,7) обработкой ультразвуком при 37 ° C сериями по 3 × 15 мин. Сульфат аммония добавляли до 30% насыщения, и осадок, полученный через 1 час при комнатной температуре, удаляли после центрифугирования (15 минут при 4000 × g ). Собранный супернатант доводили до 80% насыщения сульфатом аммония, и осажденные белки (после центрифугирования при 4000 × g в течение 10 мин при 4 ° C) ресуспендировали в дистиллированной воде и подвергали диализу против дистиллированной воды с использованием диализной трубки с отсечкой 2000 Да ( Сигма-Олдрич, Сент-Луис, Миссури, США).Затем пептидную фракцию после диализа очищали эксклюзионной хроматографией на Sephadex G-50 (Sigma-Aldrich) на колонке (72 × 2 см) с использованием того же буфера, что и при экстракции. Каждую элюированную фракцию (4 мл) собирали и контролировали на наличие пептидов при λ = 230 нм. Дополнительно фракции собирали и анализировали, используя скрининговый антибактериальный тест на твердой среде (фракции Br-f). Образцы, активные против бактерий, объединяли и подвергали ультрафильтрации через отсекающую мембрану 10 кДа (Amicon).Антибактериальную активность снова контролировали после сублимационной сушки и обрабатывали как активную пептидную фракцию из корней лопуха (фракции Br-p). Образец лиофилизированного экстракта Br-p взвешивали, рассчитывали общий выход процесса и затем готовили исходные растворы с концентрацией 20 мг / мл.

4.2. Определение молекулярной массы MALDI

Методика MALDI использовалась для мониторинга очистки пептидов. Для измерения молекулярных масс пептидов образец Br-p анализировали на масс-спектрометре с лазерной десорбцией / ионизацией по времени пролета Ultraflextreme (MALDI TOF / TOF; Bruker, Бремен, Германия).MALDI-анализ проводился по ранее предложенной методике [49]. Вкратце, 0,5 мкл образца пептида смешивали с таким же объемом насыщенного раствора матрицы, содержащего α-циано-4-гидроксикоричную кислоту (HCCA, Bruker, Бремен, Германия) и 2,5-дигидроксибензойную кислоту (DHB, Bruker, Бремен, Германия). Германия). Затем полученную смесь наносили на планшет AnchorChip MALDI (Bruker, Бремен, Германия) с предварительно нанесенными пятнами HCCA в ацетоне. Анализируемые пептиды Br-p подвергали мягкой ионизации с использованием MALDI-TOF в линейном режиме и регистрировали в режиме активного положительного отражателя в диапазоне 800–5000 m / z с частотой лазера 500 Гц и 2000 отсчетов импульсов.Собранный спектр был сглажен с использованием метода Савицки – Голея, базовая линия скорректирована (алгоритм базовой линии Top Hat), а список пиков для отношения сигнал / шум> 3 был создан с использованием программного обеспечения flex Analysis 3.0 (Bruker, Бремен, Германия). ). Основные пики с отношением сигнал / шум более 20 были отнесены к секвенированию RapidDeNovo с использованием спектров фрагментации, полученных в тандемном режиме MS / MS. С этой целью данные МС / МС были загружены и распознаны автоматически, b- и y- ионы были обнаружены, а программное обеспечение предсказало последовательность или ее фрагмент на основе представленных пиков.Были даны автоматически предсказанные последовательности с указанием вероятности их появления. Наиболее вероятная последовательность (или фрагмент последовательности) затем анализировалась алгоритмом BLAST для поиска областей сходства аминокислот, чтобы отнести их к белкам, из которых они произошли. Мы выбрали «белок-белок BLAST» в качестве алгоритма поиска, который просто сравнивает пептидный фрагмент с базой данных белков. Мы выбрали только белки семейства Asteraceae для сравнения, и обозначенные пептидные фрагменты были на 100% идентичны подобранным белкам.Знание последовательности данного белка позволило определить последовательность пептида с заданной массой ( m / z ) с помощью PeptideMass ExPASy [50]. Затем пептидная последовательность была проанализирована на наличие активных фрагментов в базе данных BIOPEP-UWM, при этом были указаны теоретическая биологическая активность и изоэлектрическая точка [51].

4.3. Антимикробные анализы

Антибактериальные анализы были выполнены с использованием микроаэробных штаммов Propionibacterium acnes PCM 2400 и Propionibacterium acnes PCM 2334, а также аэробных штаммов Staphylococcus aureus ATCC 25923, эпидермолокации Staphylococc. ATCC 27853 и Escherichia coli ATCC 25992 как микробная причина появления прыщей.Перед проведением экспериментов микроаэробные бактерии выращивали отдельно на агаре BHI (BioMaxima SA, Люблин, Польша), pH 6,0, в анаэробных условиях в течение 48 ч при 37 ° C или аэробные бактерии в агаре MH (BioMaxima SA Poland). в течение 24 часов при 37 ° C. Штаммы бактерий разводили в бульоне (бульон BHI (BioMaxima SA Poland) в случае микроаэробных бактерий или бульон MH (BioMaxima SA Poland) в случае аэробных бактерий), чтобы получить 1,5 × 10 ⁸ КОЕ / мл бактериальной культуры для микробиологических анализов.

4.4. Антибактериальная активность в твердой среде

Предварительную антибактериальную активность образцов корней лопуха в отношении патогенных грамположительных микроаэробных и аэробных бактериальных угрей оценивали путем измерения зон ингибирования методом дисковой диффузии [52]. Анализы антибактериальной дисковой диффузии проводили на чашках Петри с твердой средой (агар BHI (pH 6,0 [28] или агар M-H). Соответствующие культуры штаммов отдельно распределяли по поверхности агара стерильным ватным тампоном.Далее каждый образец (10 мкл) помещали на чашки Петри с агаризованной средой. После 24 часов инкубации при 37 ° C (для аэробных штаммов) или 48 часов при 37 ° C (для микроаэробных штаммов) зоны микробного роста, созданные вокруг исследуемых образцов лопуха, были измерены и зарегистрированы как диаметры ингибирования (мм ).

4.5. Метод микроразведения в бульоне

Метод микроразведения в бульоне использовался для оценки минимальной ингибирующей концентрации (МИК) в соответствии с документом CLSI (рабочие стандарты CLSI для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам, Восемнадцатое международное приложение, документ CLSI M7-MIC, Институт клинических лабораторных стандартов, Уэйн. ) с некоторыми изменениями.Самая низкая концентрация тестируемого соединения (мкг / мл), которая не приводила к видимому росту бактерий, рассматривалась как значение MIC. Серийное удвоение разведения образцов лопуха готовили в 96-луночных планшетах (200 мкл на лунку). Подходящую среду (бульон M-H, бульон BHI) использовали в качестве разбавителя. Конечные концентрации образцов лопуха составили 4000–7,812 мкг / мл. Наконец, в каждую лунку добавляли 2 мкл инокулята тестируемого бактериального штамма (1,5 × 10 ⁸ КОЕ / мл).Испытания проводились либо при 37 ° C в течение 24 часов (аэробные штаммы), либо через 48 часов (микроаэробные штаммы). После инкубации панель подвергали цифровому анализу при 600 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов Bio Tech Synergy (США) со специальной системой программного обеспечения. Интенсивность роста в каждой лунке сравнивали с отрицательным (прозрачный бульон) и положительным (бульон с инокулятом) контролями. Кроме того, минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) получали путем распределения на агаре 5 мкл среды из прозрачной лунки, которая не показывала никакого видимого роста после инкубации во время теста MIC.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов, и MBC определяли как самую низкую концентрацию образца без роста бактерий. Каждый эксперимент повторяли в трех экземплярах.

4.6. Оценка цитотоксичности

Эксперимент с культурой клеток проводили с использованием линии клеток фибробластов кожи человека (клетки BJ из Американской коллекции типовых культур ATCC, Великобритания). Клетки BJ культивировали в EMEM с добавлением 10% FBS, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина и поддерживали при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO ₂ и 95% воздуха.Клетки высевали в 96-луночные планшеты в 100 мкл полной ростовой среды (с добавлением 10% FBS) в концентрации 1,5 × 10 ⁴ клеток / лунку и инкубировали в течение 24 ч при 37 ° C в увлажненная атмосфера 5% CO ₂. По истечении этого времени образец Br-p сначала разбавляли в ДМСО, чтобы получить исходный раствор с концентрацией 10 мг / мл, а затем раствор разбавляли в культуральной среде с добавлением 2% FBS. Затем культуральную среду заменяли 100 мкл серийных разведений образца пептида Br-p.Необработанные клетки использовали в качестве контроля цитотоксичности, а различные концентрации ДМСО использовали в качестве контроля растворителя. Культуры клеток инкубировали при 37 ° C в течение 24 ч. Цитотоксические эффекты оценивали с помощью теста МТТ. Эксперимент повторяли в трех отдельных измерениях. Полумаксимальная цитотоксическая концентрация (CC ₅₀) была определена как концентрация образца, необходимая для снижения жизнеспособности клеток до 50%. Значения CC ₅₀ были рассчитаны с помощью четырехпараметрического нелинейного регрессионного анализа (GraphPad Prism 5, версия 5.04) и были представлены как средние значения ± стандартное отклонение (SD).

4.7. Антиоксидантная активность — DPPH

^● Метод

В настоящем исследовании оценивалась антиоксидантная активность образцов Br-p с использованием анализа по улавливанию радикалов дифенилпикрилгидразил (DPPH ^●) (Sigma-Aldrich, США) на основе метода Абделя Монейма [53 ]. Этот анализ проводили спектрофотометрически в 96-луночных планшетах с использованием цифрового ридера Bio Tech Synergy (США). Исчезновение цвета DPPH (100 мкл 0.1 мМ в 95% этаноле) через 20 мин контролировали при 517 нм. Это обесцвечивание DPPH или его отсутствие было вызвано присутствием 10 мкл испытанных образцов в диапазоне концентраций 50–800 мкг / мл. Из-за образовавшегося осадка (в некоторых образцах) во время инкубации (в результате этанола DPPH с комбинацией образцов) после 20 мин инкубации смесь нужно было центрифугировать, осадок отбросить, а прозрачный раствор прочитать в чистый 96-луночный планшет. Аскорбиновую кислоту и глутатион (GSH) использовали в качестве стандартов для анализа поглощения 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила.Следующее уравнение было использовано для расчета процента обесцвечивания DPPH образца:

% DPPH ^● радикальное ингибирование = [(контроль Abs — образец Abs) / контроль Abs] × 100

(1)

где Abs — поглощение при 517 нм.

Активность по улавливанию радикалов выражали как концентрацию ингибирования (IC ₅₀), то есть концентрацию образца, необходимую для ингибирования 50% свободных радикалов DPPH. IC ₅₀ определяли графически по графику кривой между процентами активности поглощения DPPH и концентрацией образца.

4.8. Повязка для лечения акне Creation

Повязка для лечения кожных заболеваний, связанных с акне, была создана с использованием природных полисахаридов, сшитых генипином (Sigma-Aldrich, США). Вкратце, 1,25% хитозана (степень деацетилирования 75–85%, 50–190 кДа, Sigma-Aldrich, США) и 1,25% альгинат натрия (Sigma-Aldrich, США) отдельно растворяли в 10 мл 0,5% уксусной кислоты и воды. соответственно. Затем в хитозан, стоявший на магнитной мешалке, порциями заливали альгинат. После полного смешивания двух полисахаридов добавляли β-глицерофосфат кальция (10 мг / мл), используемый в качестве неорганического наполнителя, и перемешивали в течение 30 минут при 37 ° C.Полученный гидрогель был разделен на две части: одну как немодифицированный контроль и другую, модифицированную Br-p (0,05 мг / мл) в качестве активного вещества. Наконец, добавляли 1% генипин (0,6 мкг / мл) в качестве бифункционального сшивающего агента с дальнейшим перемешиванием до получения гомогенной смеси. Полученные модифицированные и немодифицированные гели количественно переводили в подходящие формы и оставляли на 6 ч при комнатной температуре для сшивания. Заключительная стадия формирования повязки была глубокой заморозкой (-70 ° C) и лиофилизацией (LYO GT2 Basic SRK SystemTechnik, GmbH, Германия), в результате чего были получены диски диаметром около 6.5 мм и толщиной около 0,2 мм. Модифицированные и немодифицированные повязки стерилизовали с использованием кожуха из пластика / бумаги в этиленоксиде перед дальнейшим тестированием.

4.9. Протравка посев бактериальных штаммов для определения образования биопленок

Образцы сухой повязки (немодифицированная повязка в качестве контроля; повязка, модифицированная Br-p) промывали 100 мкл PBS и затем переносили на дно 24-луночных планшетов из полистирола (CytoOne, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Каждую лунку с образцом-диском внутри заполняли 1000 мкл подходящего бульона (BHI или M-H).Наконец, в каждую лунку добавляли 10 мкл посевного материала (1,5 × 10 ⁸ КОЕ / мл). Для анализа моновидовой биопленки это были P. acnes PCM 2400 и S. aureus ATCC 25923. Контроли стерильности (только бульон M-H или BHI) были включены во все эксперименты. Чтобы обеспечить образование биопленки, то есть адгезию планктонных форм бактерий в колониях, прикрепленных к биоматериалу, чашки инкубировали вдвое дольше. А именно, чашки с аэробными бактериями инкубировали в течение 48 часов, а с микроаэробными бактериями — 96 часов, оба при 37 ° C.Испытания проводились в трех повторностях.

4.10. Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия Визуализация биопленок

Жизнеспособность бактерий и их адгезия к поверхности материала определяли с помощью двойного флуоресцентного окрашивания как для живых, так и для мертвых бактерий с использованием набора для анализа жизнеспособности / цитотоксичности для бактерий LIVE / DEAD Cells (Biotium, Hayward, CA , СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Образцы повязок с бактериальными суспензиями готовили для анализа конфокальной микроскопии после инкубации. Сначала среду из лунок удаляли и осторожно дважды промывали 200 мкл 0.9% NaCl, чтобы удалить плохо приставшие планктонные бактерии и оставить только биопленку, прикрепленную к материалу. Затем образцы переносили в свежие лунки и заполняли 200 мкл 0,9% NaCl и красителя LIVE / DEAD. Раствор этого красителя был приготовлен путем смешивания 1 мкл DMAO с 1 мкл EthD-III в 8 мкл 0,9% NaCl. Три микролитра полученного таким образом раствора живого / мертвого красителя добавляли в лунки, содержащие диск, с 200 мкл PBS. Образцы инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте, и колонии бактерий, прикрепленные к образцам повязок, визуализировали с помощью конфокального микроскопа (CLSM) со специальным программным обеспечением.

4.11. Статистический анализ

Результаты выражены как среднее ± RSD. Статистический анализ был выполнен с помощью тестов дисперсионного анализа (ANOVA), и статистическая значимость была установлена соответственно на уровне P = 0,05.

5. Выводы

Проведенные исследования позволили получить многообещающие результаты относительно антибактериальной и антиоксидантной активности протестированных пептидов лопуха. Полученный раствор, содержащий 46 пептидов Br-p с величиной менее 5000 Да из корней лопуха, обладал противоугревыми свойствами и не был токсичен для культур фибробластов.Эти свойства активных пептидов позволили использовать их для производства терапевтического перевязочного материала (Br-p / хитозан / альгинат натрия) для использования при инфекциях против грамположительных бактерий при кожных акне. Одним из пептидов является LRCDYGRFFASKSLDPLKKRR, чья теоретическая активность pI и бактериального лиганда пермеазы может обладать антибиотическими, антиоксидантными и антисеборейными свойствами. Однако необходимы глубокие исследования биохимического анализа выделенной фракции пептида Br-p.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Катаржину Климек с кафедры и кафедры биохимии и биотехнологии Люблинского медицинского университета (Польша) за анализ цитотоксичности, Михала Войчика с кафедры и кафедры биохимии и биотехнологии Медицинского университета. Люблин (Польша) за анализы с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа и Станислав Виньярчик из отдела эпизоотологии Клиники инфекционных заболеваний Университета естественных наук (Польша) за предоставление оборудования для определения MALDI TOF / TOF.

Сокращения

Минимальная ингибирующая концентрация по МПК; Минимальная бактерицидная концентрация МБК; Индекс селективности СИ; ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота; MALDI TOF / TOF матричный лазерный десорбционный / ионизационный времяпролетный масс-спектрометр; Стандартное отклонение SD; Американская коллекция типовых культур ATTC; Польская коллекция микроорганизмов PCM; BHI Brain Heart Infusion; М. Х. Мюллер-Хинтон; Колониеобразующие единицы КОЕ; Фосфатно-солевой буферный раствор PBS; Диметилсульфоксид ДМСО; Минимальная необходимая среда EMEM Eagle; FBS фетальная бычья сыворотка; МТТ метилтиазолилдифенилтетразолий бромид; Конфокальный лазерно-сканирующий микроскоп CLSM; GSH глутатион; pI изоэлектрическая точка.

Вклад авторов

Концептуализация, M.M.-K .; Курирование данных, М.М.-К. и K.M .; Формальный анализ, М.М.-К. и К.М .; Финансирование, G.G .; Методология, М.М.-К. и К.М .; Письмо — черновик, М.М.-К .; Написание — просмотр и редактирование, К.М. и Г. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

Финансирование

Это исследование финансировалось Министерством науки и высшего образования Польши. Проект DS2 Медицинского университета Люблина: «Оценка биологических свойств природных и синтетических веществ с точки зрения модификации медицинских биоматериалов».Работа разработана с использованием оборудования, закупленного в рамках договора № POPW.01.03.00-06-010 / 09-00 Операционная программа развития Восточной Польши на 2007–2013 гг., Приоритет I, современная экономика, производственная деятельность 1.3. Продвижение инноваций.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сноски

Наличие образца: Образцы соединений можно получить у авторов.

Список литературы

2. Росс Дж.И., Снеллинг А.М., Карнеги Э., Коутс П., Канлифф У.Д., Беттоли В., Тости Г., Кацамбас А., Гальван П., Дель Пульгар Дж. И др. Устойчивые к антибиотикам прыщи: уроки Европы. Br. J. Dermatol. 2003. 148: 467–478. DOI: 10.1046 / j.1365-2133.2003.05067.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Заслофф М. Магайнины, класс антимикробных пептидов из кожи Xenopus: выделение, характеристика двух активных форм и частичная последовательность кДНК предшественника. Proc. Nat. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 1987. 84: 5449–5453. DOI: 10.1073 / пнас.84.15.5449. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Boesze-Battaglia K., Schimmel R.J. Липидный состав и распределение клеточной мембраны: значение для функции клеток и уроки, извлеченные из фоторецепторов и тромбоцитов. J. Exp. Биол. 1997; 200: 2927–2936. [PubMed] [Google Scholar] 8. Лю З., Ма П., Хольцмарк И., Скауген М., Эйсинк В.Г., Брурберг М.Б. Новый тип антимикробного белка, продуцируемого патогеном растений Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Прил. Environ.Microbiol. 2013. 79: 5721–5727. DOI: 10.1128 / AEM.01065-13. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Хаммами Р., Бен Хамида Дж., Верготен Г., Флисс И. Фитэмп: база данных, посвященная антимикробным пептидам растений. Nucleic Acids Res. 2009; 37: D963 – D968. DOI: 10,1093 / нар / gkn655. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Чжао М., Ма Ю., Пань Й.Х., Чжан С.Х., Юань В.X. Гевеиноподобный белок и хитиназа класса I с противогрибковой активностью из листьев бумажной шелковицы.Биомед. Chromatogr. 2011; 25: 908–912. DOI: 10.1002 / bmc.1543. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сегура А., Морено М., Гарсия-Ольмедо Ф. Очистка и антипатогенная активность белков-переносчиков липидов (БПЛ) из листьев арабидопсиса и шпината. FEBS Lett. 1993. 332: 243–246. DOI: 10.1016 / 0014-5793 (93) 80641-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Giudici A.M., Regente M.C., Villalain J., Pfuller K., Pfuller U., De la Canal L. Вискотоксины Misctletoe вызывают проницаемость мембран и гибель спор у фитопатогенных грибов.Physiol. Растение. 2004; 121: 2–7. DOI: 10.1111 / j.0031-9317.2004.00259.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Липкин А., Анисимова В., Никонорова А., Бабаков А., Краузе Э., Бинерт М., Гришин Е., Егоров Т. Дефенсины — компоненты врожденной иммунной системы растений, цветов и стеблей. Protein Pept. Sci. 2005; 6: 85–101. [Google Scholar] 15. Террас Ф. Р., Скуфс Х. М., Де Болле М. Ф., Ван Левен Ф., Рис С. Б., Вандерлейден Дж., Камму Б. П., Брокерт В. Ф. Анализ двух новых классов растительных противогрибковых белков редиса (Raphanus sativus L.) семена. J. Biol. Chem. 1992; 267: 15301–15309. [PubMed] [Google Scholar] 16. Рогожин Е.А., Ощепкова Ю.И., Одинцова Т.И., Хадеева Н.В., Вешкурова О.Н., Егоров Т.А., Гришин Е.В., Салихов С.И. Новые противогрибковые дефенсины из семян Nigella sativa L. Plant Physiol. Biochem. 2011; 49: 131–137. DOI: 10.1016 / j.plaphy.2010.10.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Ян X., Xiao Y., Wang X., Pei Y. Экспрессия нового небольшого антимикробного белка из семян пустырника (Leonurus japonicus) придает табаку устойчивость к болезням.Прил. Environ. Microbiol. 2007. 73: 939–946. DOI: 10.1128 / AEM.02016-06. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Зоттич У., Да Кунья М., Карвалью А.О., Диас Г.Б., Сильва Н.С., Сантос И.С., До Насименто В.В., Мигель Э.С., Мачадо О.Л., Гомеш В.М. Очистка биохимических характеристик и противогрибковой активности нового белка-переносчика липидов (LTP) из семян Coffea canephora со свойствами ингибитора α-амилазы. Биохим. Биофиз. Acta. 2011; 4: 375–383. DOI: 10.1016 / j.bbagen.2010.12.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Липкин А., Анисимова В., Никонорова А., Бабаков А., Краузе Э., Бинерт М., Гришин Е., Егоров Т. Антимикробный пептид Ar-AMP из семян амаранта (Amaranthus retroflexus L.). Фитохимия. 2005; 66: 2426–2431. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2005.07.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Уоткинс Ф., Пендри Б., Санчес-Медина А., Коркоран О. Антимикробные анализы местных британских растений Тайри, используемых в англосаксонской медицине для составов для заживления ран в Англии 10-го века.J. Ethnopharmacol. 2012; 144: 408–415. DOI: 10.1016 / j.jep.2012.09.031. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Lou Z., Li C., Kou X., Yu F., Wang H., Smith G.M., Zhu S. Антибактериальный, антибиотикопленочный эффект фракции листьев лопуха (Arctium lappa L.) и его эффективность в консервировании мяса. J. Food Prof.2016; 79: 1404–1409. DOI: 10.4315 / 0362-028X.JFP-15-576. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Fierascu R.C., Gieorgiey M.I., Fierascu I., Unguereanu C., Avramescu S.M., Ortan A., Georgescu M.I., Sutan A.N., Zanfirescu A., Dinu-Pirvu C.E., et al. Митодепрессивные, антиоксидантные, противогрибковые и противовоспалительные эффекты дикорастущих растений Румынии Arctium lappa L. (Asteraceae) и Veronica perlica Poiret (Plantaginaceae) Food Chem. Toxicol. 2018; 111: 44–52. DOI: 10.1016 / j.fct.2017.11.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Карлотто Дж., Де Соуза Л.М., Баджо К.Х., Вернер М.Ф., Мария-Феррейра Д., Сассаки Г.Л., Якомини М., Чиприани Т.Р. Полисахариды из Arctium lappa L .: Химическая структура и биологическая активность.Int. J. Biol. Макромол. 2016; 91: 954–960. DOI: 10.1016 / j.ijbiomac.2016.06.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Annunziata G., Barrea L., Ciampaglia R., Cicala C., Arnone A., Savastano S., Nabavi SM, Tenore GC, Novellino E. Arctium lappa способствует лечению сахарного диабета 2 типа, регулируя гомеостаз глюкозы и улучшая оксидативный стресс: критический обзор исследований in vitro и in vivo на животных. Фитотэр. Res. 2019; 33: 2213–2220. DOI: 10.1002 / ptr.6416. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26.Хоу Б., Ван В., Гао Х., Цай С., Ван С. Влияние водного экстракта корней Arctium lappa L. на метаболизм липидов в сыворотке. J. Int. Med. Res. 2018; 46: 158–167. DOI: 10.1177 / 0300060517716341. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Гареб Н., Ханна П.А., Саид М.М. Синтез и биологическая активность новых производных индол-3-карбинола и (бензимидазолилметил) триазол-3,4-диамина. Afr. J. Pharm. Sci. Pharm. 2012: 41–65. [Google Scholar] 28. Achermann Y., Goldstein E.J., Coenye T., Shirtliff M.E. Propionibacterium acnes: от комменсала до условно-патогенного возбудителя имплантата, связанного с биопленкой. Clin. Microbiol. Ред. 2014; 27: 419–440. DOI: 10.1128 / CMR.00092-13. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Перейра Дж. В., Бергамо, округ Колумбия, Перейра Дж. О. Антимикробная активность компонентов Arctium lappa в отношении микроорганизмов, обычно обнаруживаемых при эндодонтических инфекциях. Braz. Вмятина. J. 2005; 16: 192–196. DOI: 10.1590 / S0103-64402005000300004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30.Gentil M., Pereira J.V., Silva Sousa Y.T.C., Pietro R., Sousa Neto M.D., Vansan L.P., Suzelei de Castro F. Оценка in vitro антибактериальной активности Arctium lappa в качестве фитотерапевтического агента, используемого во внутриканальных повязках. Фитотэр. Res. 2006. 20: 184–186. DOI: 10.1002 / ptr.1829. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Пирву Л., Никореску И., Хлевка К., Альбу Б., Никореску В. Экстракты листьев лопуха (Arctium lappa) повышают антимикробную эффективность обычных антибиотиков в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий in vitro.Откройте Chem. 2017; 15: 92–102. DOI: 10.1515 / chem-2017-0012. [CrossRef] [Google Scholar] 32. Knott A., Reuschlein K., Mielke H., Wensorra U., Mummert C., Koop U., Kausch M., Kolbe L., Peters N., Stäb F., et al. Натуральный экстракт плодов Arctium lappa улучшает клинические признаки старения кожи. J. Cosmet. Дерматол. 2008. 7: 281–289. DOI: 10.1111 / j.1473-2165.2008.00407.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Jingvi L., Yi-Zhong C., Ricky N..S.W., Calvin K.F.L., Sydney C.W.T., Стивен C.W.S., Яо Т., Янбо З.Сравнительный анализ кофеилхиновой кислоты и лигнанов в корнях и семенах различных генотипов лопуха (Arctium lappa) с высокой антиоксидантной активностью. J. Agric. Food Chem. 2012; 60: 4067–4075. [PubMed] [Google Scholar] 34. Bahnsen J.S., Franzyk H., Sayers E.J., Jones A.T., Nielsen H.M. Проникающие в клетки антимикробные пептиды — перспективы для борьбы с внутриклеточными инфекциями. Фарма. Res. 2015; 32: 1546–1556. DOI: 10.1007 / s11095-014-1550-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. База данных классификации Transpoter 2020.[(доступ 3 февраля 2020 г.)]; Доступно в Интернете: http://www.tcdb.org/36. Park S.C., Kim J.Y., Lee J.K., Hahm K.S., Park Y. Антибактериальное действие новых антибактериальных пептидов, Nod1 и Nod2, выделенных из Nordotis Discusus. J. Agric. Food Chem. 2012; 60: 6875–6881. DOI: 10,1021 / jf3006646. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Nasrollahi S.A., Taghibiglou C., Azizi E., Farboud E.S. Проникающие в клетки пептиды как новая система трансдермальной доставки лекарств. Chem. Биол. Drug Des. 2012; 80: 639–646.DOI: 10.1111 / cbdd.12008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Нгай П.Х., Нг Т. Б. Фазеококцин, противогрибковый белок с антипролиферативной активностью и активностью обратной транскриптазы против ВИЧ-1, полученный из малых бобов алой фасоли. Biochem. Cell Biol. 2005; 83: 212–220. DOI: 10.1139 / o05-037. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Наврот Р., Барыльски Дж., Новицки Г., Брониарчик Дж., Бухвальд В., Гоздзицка-Йозефяк А. Растительные антимикробные пептиды. Folia Microbiol. (Прага) 2014; 59: 81–196. DOI: 10.1007 / s12223-013-0280-4.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Лю Ю., Ян Ю., Лю Х., Донг Н., Шан А. Противомикробная активность, улучшенная селективность клеток и механизм действия коротких пептидов, полученных из РМАП-36, против бактерий и Candida. Sci. Отчет 2016; 6: 227–258. DOI: 10,1038 / srep27258. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Кумар П., Кижаккедату Дж. Н., Страус С. К. Противомикробные пептиды: разнообразие. Механизм действия и стратегии повышения активности и биосовместимости in vivo.Биомолекулы. 2018; 8: 4. DOI: 10.3390 / biom8010004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Вишнепольский Б., Заалишвили Г., Карапетян М., Насрашвили Т., Кульджанишвили Н., Габриэлян А., Розенталь А., Хурт Д., Тартаковский М., Григолава М. и др. De novo Design и тестирование in vitro антимикробных пептидов против грамотрицательных бактерий. Фармацевтика. 2019; 12:82. DOI: 10.3390 / ph22020082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Предес Ф.С., Руис А.Л., Карвалью Дж.Э., Фоглио М.А., Дольдер Х. Антиоксидантная и антипролиферативная активность экстрактов корня Arctium lappa in vitro. BMC Дополнение. Альтерн. Med. 2011; 11: 25–33. DOI: 10.1186 / 1472-6882-11-25. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Takebayashi J., Oki T., Watanabe J., Yamasaki K., Chen J., Sato-Furukawa M., Ishimi Y. Гидрофильная антиоксидантная способность овощей и фруктов, обычно потребляемых в Японии, и расчетное среднесуточное потребление гидрофильных антиоксидантов из этих овощей. продукты. Дж.Пищевые композиции. Анальный. 2013; 29: 25–31. DOI: 10.1016 / j.jfca.2012.10.006. [CrossRef] [Google Scholar] 46. Цзян X.W., Бай Дж.П., Чжан К., Ху X.L., Тиан X., Чжу Дж., Чжао К.С. Производные кофеилхиновой кислоты из корней Arctium lappa L. (лопух) и их взаимосвязи между структурой и активностью (SAR) активности по улавливанию свободных радикалов. Фитохим. Lett. 2016; 15: 159–163. DOI: 10.1016 / j.phytol.2015.12.008. [CrossRef] [Google Scholar] 47. Элиас Дж. Р., Келлерби С., Декер Э. А. Антиоксидантная активность белков и пептидов.Крит. Rev. Food Sci. Nutr. 2008. 48: 430–441. DOI: 10.1080 / 104083425615. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 48. Caie W., Shaoqian J., Gongjian F., Tingting L., Ruifeng Y., Jianting Y. Очистка и идентификация новых антиоксидантных пептидов из ферментативного гидролизата белков семян гинкго билоба. Food Sci. Technol. Res. 2013; 19: 1029–1035. [Google Scholar] 49. Синьор Л., Эрба Э. Матричный масс-спектрометрический анализ времени пролета с лазерной десорбцией / ионизацией (MALDI-TOF) интактных белков крупнее 100 кДа.J. Vis. Exp. 2013; 9: 79–86. DOI: 10,3791 / 50635.