От чего ихтиол: Ихтиоловая мазь инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Ichthyol ointment мазь д/наружн. прим. 10%: туба 25 г или банки 5, 10, 15, 20, 25 или 30 г (33966)

Ихтиол мазь для наруж. прим. 20% туба 30г

Краткое описание

Московская фарм.ф-ка, Российская Федерация, противовоспалительное средство, оказывает противомикробное, кератопластическое действие. Ускоряет созревание фурункулов. Показание к применению — рожа, экзема, пиодермия.; ихтаммол — 20 г, вазелин — 80 г

Состав

Состав: Мазь 20% — 100 г:активные вещества: ихтиол — 20 г;вспомогательные вещества: вазелин медицинский ? 80 г.Мазь для наружного применения 10% и 20%. По 25 г в банках оранжевого стекла; по 30 г в тубах алюминиевых. Каждую банку или тубу вместе с инструкцией по медицинскому применению помеща­ют в пачку из картона коробочного.Допускается банки или тубы с равным количеством инструкций по применению помещать в групповую упаковку.

Упаковка для стационаров. По 1,5 кг в банках с крышками из полиэтилентерефталата или банках из полиэтилентерефталата с крышками из полиэтилена; по 15 кг в мешках из поли­этилена, мешки вкладываются в бидоны металлические.

Фармакологическое действие

Средство для наружного применения с противовоспалительной активностью. Оказывает также местное раздражающее, анестезирующее и кератопластическое действие.

Показания

Экзема, язвы, ожоги, невралгии, артриты; метрит, параметрит, сальпингит, простатит.

Способ применения и дозировка

Применяют наружно и ректально.

Побочные действия

Возможно: реакции повышенной чувствительности к ихтаммолу.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к ихтаммолу.

Особые указания

Следует соблюдать соответствие используемой лекарственной формы показаниям к применению.

Взаимодействие с другими препаратами

Несовместим в растворах с йодистыми солями, алкалоидами, солями тяжелых металлов.

Ихтиол мазь 20 % по 25 г в бан. : инструкция + цена в аптеках

Состав

действующее вещество: ихтаммол;

1 г мази содержат ихтаммола 200 мг;

вспомогательные вещества: парафин белый мягкий, глицерин.

Лекарственная форма

Мазь.

Основные физико-химические свойства: густая однородная масса черно-коричневого цвета со специфическим запахом ихтиола.

Фармакологическая группа

Антисептические и дезинфицирующие средства. Код АТХ D08А Х10.

Фармакологические свойства

Фармакодинамика.

Ихтиоловая мазь оказывает местное обезболивающее, противовоспалительное и антисептическое действие.

Показания

Ожоги, экземы, рожистое воспаление, невралгии, артриты.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к компонентам мази.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами и другие виды взаимодействия

При одновременном применении с другими препаратами для наружного применения могут образовываться новые соединения с непредсказуемым эффектом. Поэтому не следует применять препарат одновременно с другими средствами для наружного применения.

Несовместим с растворами йодистых солей, алкалоидов, солей тяжелых металлов.

Особенности по применению

Руки после нанесения мази нужно тщательно вымыть для предотвращения попадания остатков мази в глаза, нос, рот и на слизистые оболочки.

Нельзя допускать попадания мази в глаза и на слизистые оболочки.

Применение в период беременности или кормления грудью.

Женщинам в период кормления грудью не допускать попадания мази на соски. Безопасность и эффективность препарата в период беременности и кормления грудью не изучались.

Способность влиять на скорость реакции при управлении автотранспортом или другими механизмами.

Не влияет.

Способ применения и дозы

Применять наружно. Мазь наносить тонким слоем на пораженные участки кожи 2-3 раза в сутки, прикрывая повязкой. Продолжительность курса лечения обусловлена течением заболевания и эффективностью терапии.

Дети.

Опыта применения препарата у детей нет.

Передозировка

При условиях соблюдения рекомендаций передозировка не возможна.

Побочные эффекты

Возможны местные или генерализованные проявления аллергические реакций, включая кожую сыпь, зуд, жжение, покраснение, раздражение кожи, чаще в начале лечения или при длительном применении. При появлении раздражения кожи или других реакций применение мази следует прекратить.

Срок годности

Условия хранения

Хранить в оригинальной упаковке при температуре не выше 25 °С.

Хранить в недоступном для детей месте.

Упаковка

По 25 г в тубах № 1 или банках.

Категория отпуска

Производитель

АО «Лубныфарм».

Местонахождение производителя и адрес места осуществления его деятельности.

Украина, 37500, Полтавская обл., г.

Лубны, ул. Барвинкова, 16.

ИХТИОЛ 200мг 10 шт. суппозитории ректальные Нижфарм

Фармакологическое действие

Противовоспалительное, кератопластическое, местноанестезирующее и антисептическое средство для местного применения.

Состав и форма выпуска Ихтиол 200мг 10 шт. суппозитории ректальные

Суппозитории — 1 супп.:

• действующее вещество: ихтаммол (ихтиол) — 200 мг;
• вспомогательные вещества: вода, эмульгатор Т-2, жир твердый (Витепсол (марки Н 15, W 35), Суппосир (марки NA 15, NAS 50)).

Суппозитории ректальные 200 мг.

По 5 суппозиториев в контурной ячейковой упаковке. Две контурные ячейковые упаковки вместе с инструкцией по медицинскому применению препарата помещают в пачку картонную.

Описание лекарственной формы

Суппозитории торпедообразной формы от черно-коричневого до темно-коричневого цвета с запахом ихтиола. Допускается появление белого налета на поверхности суппозитория.

Способ применения и дозы

Ректально, по 1 суппозиторию 1-2 раза в день, после очистительной клизмы или самопроизвольного очищения кишечника. Длительность курса лечения определяется лечащим врачом.

Если после лечения улучшения не наступает или симптомы усугубляются, или появляются новые симптомы, необходимо проконсультироваться с врачом. Применяйте препарат только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции.

Фармакодинамика

Противовоспалительное средство, оказывает местнообезболивающее, антисептическое действие. Противовоспалительное действие связано с ингибированием высвобождения медиаторов воспаления. При ректальном введении препарат Ихтиол оказывает раздражающее действие на слизистую оболочку прямой кишки, вследствие чего рефлекторно усиливается кровообращение в органах малого таза, улучшается обмен веществ, что способствует устранению воспаления в предстательной железе у мужчин, яичниках, маточных трубах, матке у женщин.

Фармакокинетика

Не описана.

Показания к применению Ихтиол 200мг 10 шт. суппозитории ректальные

Сальпингоофорит, эндометрит, простатит — в составе комплексной терапии.

Противопоказания

Гиперчувствительность к компонентам препарата, детский возраст (до 18 лет).

Применение Ихтиол 200мг 10 шт. суппозитории ректальные при беременности и кормлении грудью

При беременности и в период грудного вскармливания препарат применяют с осторожностью. Необходимо проконсультироваться с врачом.

Особые указания

Влияние на способность к вождению автотранспорта и управлению механизмами

Применение препарата не оказывает влияния на способность к выполнению потенциально опасных видов деятельности, требующих повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций (управление транспортными средствами, работа с движущимися механизмами, работа диспетчера и оператора).

Передозировка

О случаях передозировки препарата не сообщалось.

Побочные действия Ихтиол 200мг 10 шт. суппозитории ректальные

Возможны аллергические реакции, ощущение жжения в области заднего прохода.

Если у Вас отмечаются побочные эффекты, указанные в инструкции, или они усугубляются, или Вы заметили любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, сообщите об этом врачу.

Лекарственное взаимодействие

Несовместим в растворах с йодистыми солями, алкалоидами, солями тяжелых металлов.

Заказать Ихтиол 10 шт супп (Тульская Фарм Фабрика) в интернет-аптеке

Видное, Строительная ул, д. 3, пом. 19-25
пн-вс 8:00-20:00
8 (495) 419-24-84

г. Домодедово аэропорт, 1 этаж
пн-вс круглосуточно

г. Домодедово аэропорт, 2 этаж
пн-вс круглосуточно
8-495-419-12-81

Голиково, Усковский пр-д, 2
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-15-65

Жуковский, Клубная ул, 4/8
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 221-53-88

Москва ул. Сущевский вал,д.5,с.5.
пн-пт 08:00-21:00, сб-вс 09:00-20:00
8(495) 419 29 10

Москва, Автозаводская ул., 13/1
пн-пт 8:00-22:00, сб-вс 9:00-22:00
+7 (495)419-24-50

Москва, Живописная ул, 12
пн-пт 8:00-22:00, сб 8:00-21:00, вс 9:00-21:00
+7 495 419-06-22

Москва, Нижняя Красносельская ул, д 35, с 49
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 10:00-22:00
+7 495 419 13 48

Москва, Самора Машела ул, 2А
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 9:00-21:00
+7 495 419-12-51

Москва, ул. Большая Тульская, д.11
пн-пт 08:00-21:00, сб-вс 09:00-20:00
8(495) 419 30 12

Ногинск, 1-ая Ильича ул, строение 6/29
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 221-53-85

Ногинск, Дмитрия Михайлова ул, 1
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-06-21

Одинцовский городской округ, Трехгорка, ул. Трехгорная, 4
пн-вс 09:00-21:00
+7(495)419-12-85

Химки, Ленинский пр, 1к1
пн-вс 8:00-21:00
+7 495 419 12 97

Противовоспалительное действие бледного сульфированного сланцевого масла (ICHTHYOL pale) в тесте на эритему UVB

Цель и дизайн: В клиническом исследовательском институте противовоспалительный эффект бледного сульфированного сланцевого масла по сравнению с гидрокортизоном исследовали в плацебо-контролируемом клиническом исследовании с использованием двойного слепого дизайна и случайного распределения обработок на испытательных полях.

Предметы: В этом испытании приняли участие 20 добровольцев мужского и женского пола со здоровой кожей в испытательных зонах.

Уход: Все субъекты получали различные концентрации бледного сульфированного сланцевого масла (2% и 4%), носитель без активных ингредиентов и контрольный продукт, содержащий 0,5% гидрокортизона.

Методы: На обработанные поля было нанесено около 300 мкл исследуемого препарата.Препарат вводили в течение 23 ч. Также были включены необработанные, облученные и необработанные необлученные контрольные поля. Тестовые поля сравнивались индивидуально. Четыре различных дозы УФ-излучения (1; 1,25; 1,6 и 2 МЭД) были протестированы на каждом добровольце. Тестовые поля были закрыты на 6 ч. Через 7 ч проводили измерение колориметром. После измерения обработку повторили. Тестовые поля закрывали еще на 16 ч и тщательно вытирали тестовые препараты.Через час были выполнены измерения цвета после облучения колориметрическим детектированием. Для статистической оценки использовался дисперсионный анализ.

Полученные результаты: 4% бледного сульфированного сланцевого масла и 0,5% гидрокортизона имели значительно большую эффективность, чем носитель (p = 0,0001). Не было различий между эффективностью 4% бледного сульфированного сланцевого масла и 0,5% гидрокортизона (p = 0.5169).

Выводы: Эти результаты демонстрируют противовоспалительную эффективность 4% бледного сульфированного сланцевого масла и помогают объяснить клинические эффекты препарата при терапии атопической экземы.

Битумосульфонат натрия при розацеа модулирует воспаление

Введение

Розацеа — хроническое воспалительное заболевание кожи лица.Его можно разделить на эритематотелангиэктатическую, папулопустулезную, фиматозную и глазную розацеа. ¹ Общие проявления розацеа — приливы, преходящая или стойкая эритема, телеангиэктазии, папулы, пустулы, фиматы и (микро) отеки. По оценкам, распространенность розацеа среди взрослого населения во всем мире превышает 5%. ² Считается, что розацеа вызывается множеством факторов, таких как бактериальные протеазы, тепло, стресс / раздражение и ультрафиолетовое излучение. ³ Эти факторы активируют иммунную систему, вызывают воспаление, боль, расширение сосудов и ангиогенез в коже, тем самым инициируя и усиливая клинические проявления розацеа.

Патофизиология розацеа еще предстоит выяснить, но известно, что этому способствуют многочисленные факторы. Среди них явно замешана дисрегуляция врожденной иммунной системы, особенно макрофагов, нейтрофилов и дендритных клеток. ⁴ Макрофаги и дендритные клетки экспрессируют TLR2, который активируется внешними стимулами при розацеа, что приводит к повышенному высвобождению интерлейкина (IL) -8, IL-1β и фактора некроза опухоли альфа (TNF-α). Нейтрофилы привлекаются IL-8 и TNF-α и высвобождают протеазы (такие как калликреин (KLK) 5, матриксная металлопротеиназа (MMP) 9, эластаза) и антимикробный пептид LL-37. ⁵ LL-37 был связан с генерацией активных форм кислорода (ROS), вероятно, посредством активации никотинамидадениндинуклеотидфосфат (NADPH) оксидазы и мобилизации внутриклеточного Ca ²⁺ . ⁶ АФК играют роль в повреждении, наблюдаемом при фотостарении, этиологическом факторе развития розацеа. ⁷ Более того, ROS индуцируют продукцию VEGF, ⁸ , который вместе с IL-1β и TNF-α вносит вклад в гиперреактивность сосудов, наблюдаемую при розацеа. ⁹ Таким образом, различные факторы, которые активируют иммунную систему (например, цитокины), вызывают повреждение соединительной ткани (например, ROS, протеазы) или вызывают васкуляризацию (например, VEGF), чтобы стимулировать развитие розацеа.

Важность этих факторов в развитии розацеа становится очевидной из способов действия одобренных лекарств от розацеа. Среди распространенных методов лечения — доксициклин и местная азелаиновая кислота. Доксициклин подавляет выработку и активность MMP9, подавляет активность KLK5, снижает высвобождение провоспалительных цитокинов и синтез ROS. ⁴ Было показано, что местная азелаиновая кислота подавляет экспрессию KLK5 и кателицидинов в кератиноцитах и ​​/ или у пролеченных пациентов с розацеа. ⁴

Ихтиол (также известный как ихтаммол, битумосульфонат аммония), представленный в дерматологии немецким дерматологом Полом Герсоном Унна в 1882 году, представляет собой активный ингредиент, полученный из богатого серой горючего сланца, с противовоспалительными, антибактериальными и противогрибковыми свойствами. ^10–16 Во всем мире используются различные составы, которые используются в клинической практике для лечения различных кожных заболеваний, включая угри, экзему, псориаз и розацеа. ¹⁷ Согласно «списку предпочтительных специальных препаратов» Британской ассоциации дерматологов (BAD), ихтаммол может использоваться в дерматологии, в частности, для лечения остро воспаленной атопической экземы. ¹⁸ Соответствующая рекомендация существует для битумосульфонатов в Германии. В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании с участием 30 пациентов с папулопустулезной розацеа таблетки с энтеросолюбильным покрытием натрия битуминосульфоната показали значительное уменьшение количества папул / пустул, эритемы и шелушения без побочных эффектов.Дозировка для лечения розацеа составляла две таблетки три раза в день в течение первых двух недель, а затем по одной таблетке три раза в день в течение следующих четырех недель. ¹⁹ В 1952 году на рынок была выведена композиция сухого вещества битумосульфоната натрия (SBDS), которая одобрена только в Германии и показана для лечения розацеа.

Помимо противовоспалительного и ранозаживляющего действия, ихтиол также ингибирует окислительный взрыв и миграцию макрофагов и высвобождение лейкотриена B ₄ из нейтрофилов. ^12,20,21 Однако подробные механизмы и потенциальные клетки-мишени и белки-мишени ихтиола в основном неизвестны. Поэтому в этом исследовании мы попытались определить потенциальные способы действия SBDS на нейтрофилы человека. С этой целью мы изучили генерацию различных воспалительных продуктов, включая VEGF, ROS, Ca ²⁺ , протеазы (эластаза, MMP9, KLK5) и / или синтез цитокинов и хемокинов нейтрофилами. Мы также проверили, взаимодействует ли SBDS с активностью протеаз и провоспалительных ферментов (KLK5, MMP9, 5-липоксигеназа (5-LO)).Было высказано предположение, что эти продукты играют роль в этиологии розацеа. ³

Материалы и методы

Клетки и реагенты

Первичные нейтрофилы человека культивировали в среде RPMI1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Среда содержала 1% пенициллин / стрептомицин, и клетки культивировали при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . SBDS растворяли в воде и дополнительно разбавляли в среде. SBDS, полученный из горючего сланца, был предоставлен Ichthyol-Gesellschaft.Набор для обнаружения апоптоза PE Annexin V I был приобретен у Becton Dickinson (Гейдельберг, Германия). Среду Leuko Spin покупали у pluriSelect (Лейпциг, Германия), а GM-CSF покупали у Miltenyi Biotech GmbH (Бергиш-Гладбах, Германия).

Выделение нейтрофилов человека

Человеческие нейтрофилы выделяли из лейкоцитов с использованием центрифугирования в двойном градиенте плотности. Для этого лейкоцитарные пленки объемом 40 мл (Немецкий Красный Крест, Франкфурт, Германия) или 50 мл крови здоровых доноров, давших письменное информированное согласие на участие, были смешаны с таким же количеством 2 мМ ЭДТА / PBS и наложены друг на друга. 15 мл спиновой среды мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) (вверху) и 15 мл среды Leuko Spin в пробирках на 50 мл (Greiner Bio-One International GmbH, Фриккенхаузен, Германия).Пробирки центрифугировали (1000 g, 30 мин, 20 ° C; без тормоза) и удаляли плазму. Слой клеток между мононуклеарными клетками периферической крови и эритроцитами собирали и переносили в пробирку на 50 мл, промывали один раз 2 мМ EDTA / PBS и центрифугировали (330 g, 10 мин, 20 ° C). Осадок клеток ресуспендировали в 1 мл 2 мМ EDTA / PBS, а оставшиеся эритроциты лизировали путем добавления 25 мл буфера для лизиса (155 мМ NH ₄ Cl, 10 мМ KHCO ₃ , 0,1 мМ EDTA) и инкубации в течение 5 дней. мин при комнатной температуре (RT), снова промыли 2 мМ EDTA / PBS и подсчитали клетки с использованием проточного цитометра MACSQuant ^® Analyzer 10 (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия).

Анализ цитотоксичности клеток

1 x 10 ⁵ Нейтрофилы, суспендированные в среде RPMI1640, содержащей 10% FCS и 50 нг / мл GM-CSF, высевали в 96-луночный планшет. Добавляли SBDS (10, 50, 100 мкг / мл) и инкубировали при 37 ° C в атмосфере, содержащей 5% CO ₂ , в течение 24 часов. Окрашивание аннексином было достигнуто в соответствии с рекомендациями производителя. Нейтрофилы промывали холодным PBS и ресуспендировали в связывающем буфере с аннексином V, дополненным PE аннексином V и 7-аминоактиномицином (7-AAD), и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре (25 ° C) в темноте.Клетки анализировали проточной цитометрией в течение 1 часа. Для анализа использовалось программное обеспечение FlowJo (V10). Нейтрофилы были заблокированы по каналу FSC и SSC. Популяцию нейтрофилов дополнительно анализировали с помощью окрашивания 7-AAD и аннексином V. Апоптоз определяли путем соотнесения количества мертвых клеток (положительных по аннексину V и положительных по 7-ADD) к количеству всех клеток.

Анализ высвобождения MMP9

1×10 ⁶ Нейтрофилы (120 мкл) в среде RPMI1640 с добавлением 10% FCS высевали в 96-луночный планшет.Добавляли 0, 10, 50 мкг / мл SBDS и инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . Добавляли 50 нг / мл GM-CSF и инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . Чтобы выяснить, индуцирует ли SBDS высвобождение MMP9, клетки инкубировали еще 20 мин при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . Чтобы исследовать, ингибирует ли SBDS высвобождение MMP9, добавляли 1 мкМ fMLP, инкубировали в течение 20 минут при 37 ° C в атмосфере 5% CO. _2, центрифугировали при 300 g в течение 5 минут при комнатной температуре и собирали супернатант.Концентрацию MMP9 определяли с помощью ELISA (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия) согласно протоколу поставщика. Концентрацию MMP9 экстраполировали с использованием стандартной кривой.

Анализ эластазы

Анализ эластазы выполняли, как описано Kanashiro et al. ²² Вкратце, 25000 нейтрофилов в 100 мкл среды RPMI с добавлением 10% FCS высевали в 96-луночный планшет. Добавляли 1 мкМ Cytochalasin Band 0, 10, 50 мкг / мл SBDS и инкубировали в течение 30 мин при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ .Добавляли 1 мМ SAAVNA (N-сукцинил-Ala-Ala-Val-p-нитроанилид) (в половине лунок). Чтобы исследовать, ингибирует ли SBDS высвобождение эластазы, клетки стимулировали 50 нг / мл PMA в течение 30 минут при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . Чтобы исследовать, индуцирует ли SBDS высвобождение эластазы, клетки не стимулировали и добавляли только носитель и инкубировали в течение 30 мин при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ . Высвобожденная эластаза (индуцированная PMA или SBDS) превращает SAAVNA в п-нитроанилин, который можно количественно определить спектрофотометрически при 410 нм с помощью EnSpire ^® (Perkin Elmer, Гамбург, Германия).Для анализа значения оптической плотности для образцов с SAAVNA были скорректированы с использованием образцов без SAAVNA для получения Δ оптической плотности.

Анализ VEGF

Анализ VEGF был адаптирован из Gaudry et al. ²³ Вкратце, 96-луночные планшеты предварительно покрывали 50 мкл 0,01% коллагена I (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия) в течение по меньшей мере 6 часов при комнатной температуре. Коллаген I был удален, и покрытая поверхность сушилась в течение ночи. Перед переносом клеточной суспензии лунки промывали стерильной водой, пригодной для культивирования тканей.1 × 10 ⁶ Нейтрофилы в 100 мкл среды RPMI с добавлением 10% FCS высевали в 96-луночный планшет. Добавляли SBDS (0, 10, 50 мкг / мл) и инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C в атмосфере, содержащей 5% CO ₂ . Чтобы выяснить, может ли SBDS предотвратить высвобождение VEGF, нейтрофилы стимулировали 50 нг / мл PMA в течение 2 часов. Чтобы выяснить, индуцирует ли SBDS высвобождение VEGF, клетки не обрабатывали в течение 2 часов. Клетки центрифугировали (300 g, 5 мин, RT), супернатант собирали и концентрацию VEGF определяли с помощью ELISA (Thermo Fisher Scientific, Германия), как рекомендовано поставщиком.Для анализа значения оптической плотности для стандартных и исследуемых образцов были скорректированы с помощью холостого опыта (стандарт: буфер для анализа; образцы: среда с SBDS), поскольку значения контролей уменьшались с увеличением концентрации SBDS. Концентрацию VEGF экстраполировали с использованием стандартной кривой.

Анализ MMP9

Анализ MMP9 выполняли, как описано Troeberg et al. ²⁴ Для анализа MMP9 использовали рекомбинантный человеческий фермент MMP9 (R&D Systems, Висбаден, Германия), флуорогенный субстрат Mca-PLGL-Dpa-AR-Nh3 (R&D Systems, Висбаден, Германия) и активатор п-аминофенилмеркурия ацетат (APMA ) (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия).APMA разбавляли в буфере TCNB (50 мМ Tris HCl, 10 мМ CaCl ₂ , 150 мМ NaCl, 0,05% Brij-35, pH 7,5). 100 мкг / мл rhMMP9 активировали 1 мМ APMA и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. SBDS и положительный контроль GM6001 (EMD Millipore) разводили в буфере TCNB и смешивали с активированным rhMMP9 до достижения конечного диапазона концентраций 0,61–10 000 мкг / мл и 10 мкМ, соответственно. Смесь фермент / SBDS инкубировали при 37 ° C в течение 1 часа перед добавлением 10 мкМ субстрата Mca-PLGL-Dpa-AR-Nh3 в течение следующих 60 минут.Для контроля фона SBDS или носитель инкубировали с субстратом в буфере TCNB, но без фермента. Флуоресценцию регистрировали с помощью Multimode Plate Reader (Tecan, Crailsheim, Germany) (Ext 320 нм / Em 405 нм). Ингибирование рассчитывали по следующему уравнению: (1 — (A — B1) / (C — B2)) * 100. A = RFU тестовый образец; B1 = базальная RFU без ферментов с соединением; B2 = базальная RFU без ферментов с носителем; C = RFU контроль транспортного средства с помощью ферментов. Тестовые образцы (A) были скорректированы на RFU образцов без фермента, но с SBDS (B1) из-за высокого фонового сигнала SBDS, который зависел от концентрации.

Анализ KLK5

Анализ KLK5 выполняли, как описано Matsubara et al. ²⁵ Для анализа KLK5 рекомбинантный гуманный фермент KLK5 (R&D Systems, Висбаден, Германия) и флуорогенный субстрат Boc-VPR-AMC субстрат (Boc: т-бутилоксикарбонил; AMC: 7-амино-4-метилкумарин) (R&D Systems , Висбаден, Германия). Гидролиз амидной связи R-AMC высвобождает высоко флуоресцентную группу AMC. rhKLK5 разводили в 1 М NaH ₂ PO ₄ pH 8 и SBDS (0.0001 мг / мл — 10 мг / мл) или 42,1 мкМ лейпептина или ДМСО (фоновый контроль (C) с ферментом без соединения) и инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. Добавляли 100 мкМ субстрата Boc-V-P-R-AMC и инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. Флуоресценцию регистрировали с помощью Multimode Plate Reader (Tecan, Crailsheim, Germany) (Ex380 нм / Em460 нм). Ингибирование рассчитывали по следующему уравнению: (1 — (A — B1) / (C — B2)) * 100. A = RFU тестовый образец; B1 = базальная RFU без ферментов с соединением; B2 = базальная RFU без ферментов с носителем; C = RFU контроль транспортного средства с помощью ферментов.Тестовые образцы (A) были скорректированы на RFU образцов без фермента, но с SBDS (B1) из-за высокого фонового сигнала SBDS, который зависел от концентрации.

Анализ для обнаружения LL-37

Анализ LL-37 был адаптирован из протокола Wan et al. ²⁶ 1 × 10 ⁶ Нейтрофилы (120 мкл) в среде RPMI1640 с добавлением 10% FCS высевали в 96-луночные планшеты. Нейтрофилы (выделенные из крови) предварительно инкубировали с 0, 10, 50 мкг / мл SBDS в течение 30 минут при 37 ° C / 5% CO ₂ атмосферы.Добавляли лейкотриен B ₄ (LTB ₄ ) в количестве 1 мкМ (Cayman Chemical, Michigan, USA) или клетки оставляли необработанными и инкубировали в течение 5 минут. Собирали супернатант и определяли LL-37 с помощью ELISA, как рекомендовано поставщиком (Hycultec GmbH, Бойтельсбах, Германия). Для анализа значения оптической плотности для стандартных образцов и образцов были скорректированы с таковыми для образцов без клеток. Концентрацию LL-37 экстраполировали с использованием стандартной кривой.

5-LO Анализ

Анализ 5-LO выполняли, как описано ранее. ²⁷ Вкратце, человеческие гранулоциты выделяли из лейкоцитов, полученных от здоровых доноров, промывали один раз в PBS Дульбекко и, наконец, ресуспендировали в 1 мл PBS (с 1 мМ Ca ²⁺ , 1 мг / мл глюкозы) и предварительно инкубировали в течение 15 мин. с тестируемыми соединениями при комнатной температуре. Реакцию начинали добавлением арахидоновой кислоты и ионофора A23187 в 10 мкл метанола (конечные концентрации 20 мкМ и 2,5 мкМ соответственно). Через 10 мин при 37 ° C реакцию останавливали 1 мл метанола и добавляли 30 мкл 1 н. HCl, 200 нг простагландина B1 (внутренний стандарт) и 500 мкл PBS.После центрифугирования (10 мин, 800 g, RT) образцы помещали в колонки для твердофазной экстракции C-18 (100 мг), которые кондиционировали 1 мл метанола и 1 мл воды. Колонки промывали 1 мл воды и 1 мл 25% метанола. Затем метаболиты 5-LO экстрагировали 300 мкл метанола. Экстракт разбавляли 120 мкл воды и 100 мкл разбавленного экстракта анализировали с помощью ВЭЖХ.

Анализ ROS

Для обнаружения активных форм кислорода (ROS) использовали краситель дигидрородамин (DHR) (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия) и протокол Chen et al. ²⁸ DHR превращается в родамин в присутствии ROS, который может быть обнаружен с помощью проточной цитометрии. Нейтрофилы суспендировали до конечной концентрации 0,5 × 10 ⁶ клеток / 100 мкл в 10 мл сбалансированного солевого раствора Хэнкса (HBSS) (без Ca ²⁺ / Mg ²⁺ ) и предварительно нагревали в водяная баня при 37 ° C в течение 5 мин. 200 мкл суспензии нейтрофилов добавляли в 96-луночный планшет, который уже содержал SBDS в конечной концентрации 0, 10 и 50 мкг / мл, и инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C.Добавляли 375 нг / мл DHR или HBSS, и планшет инкубировали в течение 15 мин. Чтобы исследовать, может ли SBDS предотвращать индукцию ROS, клетки стимулировали 30 нг / мл форбол-12-миристат-13-ацетата (PMA) (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия). Чтобы исследовать, индуцирует ли SBDS индукцию ROS, клетки не стимулировали PMA, а вместо этого добавляли HBSS. Реакцию останавливали охлаждением планшета на льду в течение 10 мин. Планшет центрифугировали (400 × g, 5 мин, 4 ° C), супернатанты удаляли и клетки промывали три раза 250 мкл HBSS.Осадки клеток ресуспендировали в 300 мкл фиксирующего раствора для сканирования активированных флуоресценцией клеток (FACS) (оболочка проточной цитометрической жидкости (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия), содержащей 0,5% формальдегида) и измеряли с помощью проточного цитометра MACSQuant10 (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach). , Германия). Значение флуоресценции образцов корректировали с учетом флуоресценции неокрашенного образца для получения среднего значения Δ.

Анализ высвобождения кальция

Анализ кальция был адаптирован из Ingelfinger et al. ²⁹ Вкратце, нейтрофилы ресуспендировали в 1 мл HBSS (без Ca ²⁺ / Mg ²⁺ ), центрифугировали при 300 g (RT) в течение 10 минут и супернатант отбрасывали. Стадия промывки HBSS была повторена. 10 × 10 ⁶ нейтрофилов / мл в HBSS (без Ca / Mg) смешивали с 4 мкМ Fluo-8 (Abcam, Берлин, Германия) и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C в атмосфере 5% CO. ₂ . Клетки центрифугировали при 300 g (RT) в течение 10 минут и супернатант удаляли. Осадки клеток растворяли в 1 мл HBSS (без Ca / Mg), центрифугировали при 300 g (RT) в течение 10 минут и супернатант удаляли.1 × 10 ⁶ Нейтрофилы (100 мкл) в HBSS с добавлением 1,25 мМ CaCl ₂ высевали в 96-луночный планшет с черными лунками (Greiner Bio-One GmbH, Эссен, Германия). Добавляли SBDS (0, 10, 50 мкг / мл), планшет переносили в Multimode Plate Reader (Tecan, Crailsheim, Германия) и инкубировали в течение 15 минут при 37 ° C и флуоресценцию (Ext / Em 490/520) обнаружен. 1 мкМ формил-метионил-лейцил-фенилаланин (fMLP) (Sigma Aldrich, Schnelldorf, Германия) добавляли с помощью инжектора считывающего устройства и отслеживали флуоресценцию в течение 15 мин.Для анализа значение флуоресценции, полученное после добавления fMLP, было связано со значением флуоресценции, полученным до добавления fMLP.

Экспрессия цитокинов

2 x 10 ⁶ Нейтрофилы в 2 мл среды RPMI1640 с добавлением, содержащей 10% FCS и 50 нг / мл GM-CSF, высевали в 6-луночные планшеты и инкубировали при 37 ° C в атмосфере 5% CO. 1,5 ч. Клетки предварительно инкубировали с SBDS (0, 10, 50 мкг / мл) в течение 30 минут и добавляли 50 мкг / мл зимозана в течение 1 часа при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂ .Клетки собирали и мРНК экстрагировали с помощью набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Германия), как рекомендовано поставщиком. мРНК транскрибировали в кДНК с помощью набора RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Fisher Scientific, Германия), как рекомендовано поставщиком. qPCR была достигнута с 10 нг кДНК, 0,5 мкл 5 мМ каждого праймера и SYBR ^® Select Master Mix в системе QuantStudio ™ 12K для ПЦР в реальном времени. Используемые праймеры были частично взяты из Hayashi et al. ³⁰ и описаны в таблице 1.Для анализа использовали метод ΔΔCT. Уровни экспрессии мРНК были нормализованы к эталонному гену глицеринальдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH) и относились к контрольным образцам.

Таблица 1 Последовательности праймеров

Статистический анализ

Результаты представлены в виде средних значений ± стандартные ошибки. Данные анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа и теста множественных сравнений Тьюки или двустороннего дисперсионного анализа ANOVA, а также теста множественных сравнений Даннета или Тьюки.Для всех расчетов и построения графиков использовался GraphPad Prism 8, а p <0,05 считался порогом значимости.

Результаты

SBDS ингибирует высвобождение эластазы

Для оценки цитотоксического действия SBDS на первичные нейтрофилы был проведен анализ цитотоксичности, основанный на окрашивании фосфатидилсерина, экспрессируемого на поверхности апоптотических клеток. ³¹ Определение уровней в плазме у пациентов, получавших SBDS, в настоящее время невозможно, так как сульфированный сланец состоит из более чем 10 000 различных веществ, из которых только около 100 изучены. ¹⁷ Поэтому мы использовали диапазон концентраций сульфированного сланца. масло, которое уже показало эффективность в моделях клеточных культур. ^10,13 Нейтрофилы обрабатывали SBDS в диапазоне концентраций 10–100 мкг / мл в течение 24 часов. Интересно, что 100 мкг / мл SBDS показали лишь слабый цитотоксический эффект на нейтрофилы (рис. 1А). Тем не менее, для последующих экспериментов использовались концентрации SBDS до 50 мкг / мл.

Рисунок 1 Действия SBDS на жизнеспособность и эффекторные функции первичных нейтрофилов. ( A ) Первичные нейтрофилы обрабатывали в течение 24 часов SBDS в указанных концентрациях.Количество мертвых клеток (Аннексин V + и 7-AAD +) было связано с количеством всех клеток. Данные проточной цитометрии анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo 10.1. ( B и C ). Для высвобождения MMP9 и VEGF первичные нейтрофилы предварительно инкубировали в течение 30 минут с SBDS в указанных концентрациях и стимулировали 1 мкМ fMLP, 50 нг / мл PMA или оставляли без обработки в течение 20 минут или 2 часов, соответственно. Для высвобождения эластазы нейтрофилы предварительно инкубировали с SBDS в указанной концентрации в течение 30 минут и стимулировали 50 нг / мл PMA в течение 20 часов.Эксперименты проводились в трех биологических и технических повторностях. Для оценки статистической значимости различий использовали односторонний дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Даннета. * p <0,05, *** p <0,001 указывают на значительную разницу между обработанными образцами и образцом, обработанным носителем (0 мкг / мл).

Чтобы выяснить, как SBDS снижает воспалительные процессы, мы исследовали, ингибирует ли он или индуцирует высвобождение протеаз. Для выяснения ингибирующих эффектов нейтрофилы предварительно инкубировали с SBDS, а затем стимулировали PMA для определения высвобождения эластазы или fMLP для высвобождения MMP9.Как и ожидалось, PMA индуцировал высвобождение эластазы, а fMLP — высвобождение MMP9. SBDS не влиял на вызванное PMA высвобождение MMP9, но уменьшал высвобождение эластазы в активированных нейтрофилах (рис. 1B). Для индукционного анализа нейтрофилы обрабатывали только SBDS, чтобы выяснить, способен ли SBDS индуцировать высвобождение протеаз. Сам по себе SBDS не индуцировал высвобождение MMP9 или эластазы (рис. 1B).

SBDS Ингибированный выпуск VEGF

Помимо протеаз, нейтрофилы содержат внутриклеточный пул VEGF, который секретируется при стимуляции PMA. ²³ Поскольку VEGF играет важную роль в патологии розацеа, мы также исследовали, влияет ли SBDS на высвобождение VEGF. Как и ожидалось, PMA увеличивал высвобождение VEGF примерно в 2,4 раза. Интересно, что SBDS в дозе 50 мкг / мл подавлял высвобождение VEGF в нейтрофилах, стимулированных PMA, в 1,9 раза, а также в нестимулированных нейтрофилах (рис. 1C).

SBDS подавляет MMP9 и KLK5

Затем мы исследовали, подавляет ли SBDS активность протеаз MMP9 и KLK5. В качестве положительного контроля для анализа MMP9 использовали 10 мкМ GM6001, и он показал ингибирование ≈ 88%; 42.1 мкМ лейпептина использовали в качестве положительного контроля для анализа активности KLK5, что привело к ингибированию ≈ 94%. Для SBDS наблюдались значения IC ₅₀ 50,9 мкг / мл для MMP9 и 7,6 мкг / мл для KLK5 (рис. 2A).

Рисунок 2 SBDS подавляет активность MMP9, KLK5, 5-LO и высвобождение LL-37. ( A ) Ингибирование MMP9 и KLK5 с помощью SBDS определяли с использованием рекомбинантного фермента человека. ( B ) Для определения LL-37 первичные нейтрофилы предварительно инкубировали в течение 30 минут с SBDS в указанных концентрациях и стимулировали 1 мкМ LTB 4 или оставляли без обработки в течение 5 минут.( C ) Ингибирование 5-LO с помощью SBDS определяли в первичных нейтрофилах человека. Значения IC 50 были рассчитаны с использованием программного обеспечения GraphPad Prism. *** p <0,001 указывает на значительную разницу между обработанными образцами и образцом, обработанным носителем (0 мкг / мл).

SBDS ингибирует высвобождение LL-37 в ассоциации с ингибированием 5-LO

Поскольку наши данные показывают, что SBDS ингибирует активность KLK5, протеазы, которая расщепляет кателицидин до LL-37, мы исследовали, снижает ли SBDS также высвобождение LL-37.Высвобождение LL-37 может стимулироваться лейкотриеном B ₄ (LTB ₄ ) в течение 5 минут посредством активации рецептора BLT1. ²⁶ Нейтрофилы предварительно инкубировали с SBDS и затем обрабатывали LTB ₄ или оставляли нестимулированными. LTB ₄ индуцировал высвобождение LL-37, которое ингибировалось 50 мкг / мл SBDS. Интересно, что SBDS значительно снизил высвобождение LL-37 в нестимулированных нейтрофилах (рис. 2B).

В нейтрофилах человека существует цепь положительной обратной связи между LL-37 и LTB ₄ , которая взаимно стимулирует их высвобождение. ²⁶ LL-37 вызывает транслокацию 5-LO из цитозоля в перинуклеарную мембрану в полиморфно-ядерных клетках и способствует синтезу и высвобождению LTA ₄ , предшественника LTB ₄ . Поскольку мы наблюдали снижение высвобождения LL-37 под действием SBDS в нестимулированных нейтрофилах, мы исследовали, возможно ли этот эффект опосредован ингибированием 5-LO. SBDS ингибировал 5-LO со значением IC ₅₀ , равным 33 мкг / мл, и ингибировал вызванное LTB ₄ высвобождение LL-37 в сопоставимом диапазоне концентраций 10–50 мкг / мл (рис. 2C).Эти данные показывают, что SBDS ингибирует синтез LTA ₄ (продукт 5-LO), что приводит к снижению уровня LTB ₄ . Пониженный уровень LTB ₄ в свою очередь, вероятно, снижает выброс LL-37.

SBDS запрещает производство ROS и сигнализирует о

²⁺

Образование ROS путем активации НАДФН-оксидазы и мобилизации внутриклеточного Ca ²⁺ , возможно, опосредуется LL-37. ⁶ Таким образом, мы исследовали, влияет ли SBDS на продукцию ROS и передачу сигналов Ca ²⁺ в нейтрофилах.Продукция ROS стимулировалась PMA в нейтрофилах. В нестимулированных нейтрофилах 50 мкг / мл SBDS вызывал слабое высвобождение ROS, тогда как SBDS 50 мкг / мл явно ингибировал PMA-индуцированное высвобождение ROS (рис. 3A).

Рисунок 3 SBDS подавляет высвобождение АФК и мобилизацию кальция. ( A ) Первичные нейтрофилы предварительно обрабатывали SBDS в указанных концентрациях в течение 30 минут и стимулировали 30 нг / мл PMA или не стимулировали и инкубировали в течение 1.5 ч. АФК были обнаружены с помощью проточной цитометрии. ( B ) Первичные нейтрофилы предварительно обрабатывали SBDS в указанных концентрациях в течение 30 мин и стимулировали 1 мкМ fMLP. Эксперименты проводились в трех биологических и технических повторностях. Использовали двусторонний или односторонний дисперсионный анализ с тестом множественных сравнений Даннета. * p <0,05, *** p <0,001 указывают на значительные различия между обработанными образцами и образцом, обработанным носителем (0 мкг / мл).

Мы также исследовали, влияет ли SBDS на высвобождение кальция.Хемотаксический пептид fMLP использовали для индукции высвобождения кальция в нейтрофилах. Как и ожидалось, fMLP индуцировал высвобождение кальция в клетках HEK293. SBDS не был эффективным в нестимулированных клетках HEK293, но ингибировал зависимым от концентрации образом вызванное fMLP высвобождение кальция (фиг. 3B).

SBDS Повышенный уровень экспрессии мРНК хемокинов

Наши результаты показывают, что SBDS ингибирует синтез LTA ₄ , предшественника LTB ₄ , хемотаксического липидного медиатора.Чтобы исследовать, взаимодействует ли SBDS также с образованием хемокинов и цитокинов, было проанализировано влияние SBDS на индуцированную зимозаном экспрессию цитокинов и хемокинов. Hayashi et al. Показали, что некоторые цитокины конститутивно экспрессируются (IFNγ, TNFα, IL12, CCL2) и что некоторые индуцируются с помощью агонистов TLR2, таких как зимозан (CCL3, CCL4, CCL20, CXCL1, IL8, IL1β) в нейтрофилах. ³⁰ Как и ожидалось, индуцибельные цитокины, кроме CXCL1, сильно экспрессировались после стимуляции зимозаном.В нестимулированных нейтрофилах SBDS увеличивал экспрессию мРНК IL1β, IL12, CCL2 и CXCL1. Однако, за исключением CCL2, увеличение было незначительным (в 1,5–2,5 раза) по сравнению с изменением, вызванным зимозаном. В нейтрофилах, стимулированных зимозаном, SBDS активировал только конститутивно экспрессируемые цитокины, IFNγ и CCL2 (рис. 4).

Рисунок 4 Действие SBDS на высвобождение цитокинов в первичных нейтрофилах. Первичные нейтрофилы предварительно инкубировали в течение 30 минут с SBDS в указанных концентрациях и стимулировали 50 мкг зимозана или оставляли без лечения в течение 1.5 ч, и высвобождение цитокинов определяли количественной ПЦР. Экспрессия мРНК цитокинов была нормализована к эталонному гену GAPDH и относилась к контролю носителя. Для оценки различий использовали двухфакторный дисперсионный анализ ANOVA с тестом множественных сравнений Даннета. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 указывает на значительную разницу между обработанными образцами и образцом, обработанным носителем (0 мкг / мл).

Обсуждение

Нейтрофилы незаменимы для защиты от микробов, которым они эффективно противодействуют, высвобождая токсичные ферменты, синтезируя АФК и производя медиаторы воспаления.Недавние открытия также подчеркнули важную роль нейтрофилов как стимуляторов разрешения воспалительного процесса, указывая на то, что их биологические функции выходят далеко за рамки простого уничтожения патогенов. ³² Более того, считается, что микробы, такие как клещи демодекс, вызывают воспаление, активируют нейтрофилы и тем самым способствуют развитию розацеа. ³³ В этом отношении очень важно, что наши результаты показывают, что SBDS подавляет воспалительный потенциал нейтрофилов за счет снижения высвобождения LL-37, эластазы, VEGF, ROS и мобилизации кальция, а также ингибирования 5-LO, KLK. -5 и MMP9 активности.

Ранее сообщалось, что ихтиол ингибирует 5-LO. ¹⁰ Мы также наблюдали, что SBDS ингибирует 5-LO и в том же диапазоне концентраций снижает высвобождение эластазы, VEGF, ROS и LL-37 в нейтрофилах. В лейкоцитах, хотя и не оказывая никакого эффекта на нестимулированные нейтрофилы, ихтиол снижает индуцированный ионофором синтез LTB ₄ . ¹² Мы предполагаем, что эти эффекты связаны и что ихтиол / SBDS взаимодействует с осью стимулированного LTB ₄ / LL-37 / Ca ²⁺ / гранулярного высвобождения (VEGF, эластаза, ROS) (рис. 5).Поскольку ихтиол не ингибирует высвобождение лейкотриенов в нестимулированных нейтрофилах, возможно, имеют место ¹² различных механизмов стимулированных нейтрофилов по сравнению с нестимулированными.

Рисунок 5 Схема потенциального взаимодействия SBDS с осью LTB4 / LL-37 / Ca 2 + / ROS-эластаза-VEGF. 5-LO синтезирует LTA 4 , предшественник LTB 4 . LTB 4 индуцирует высвобождение LL-37, продуцируемого расщеплением кателицидина под действием KLK5.LL-37 обеспечивает положительную обратную связь, активируя 5-LO. LL-37 индуцирует мобилизацию кальция, который, в свою очередь, вызывает высвобождение KLK5 и высвобождение четырех разных гранул: первичные гранулы (1 °), нагруженные, например, эластазой, вторичные гранулы (2 °), содержащие, например, кателицидин, третичные гранулы (3 °) с например, MMP9 и, в-четвертых, секреторные пузырьки (не показаны). SBDS непосредственно подавлял активность 5-LO, KLK5 и MMP9, на что указывают значения IC 50 . Кроме того, SBDS снижал высвобождение LL-37, ROS, эластазы и VEGF, как показано красной стрелкой, тогда как высвобождение MMP9 не влияло, как показано зеленой стрелкой. Сокращения: Са, кальций; KLK5, калликреин 5; 5-ЛО, 5-липоксигеназа; MMP9, матричная металлопротеиназа; АФК, активные формы кислорода; VEGF, фактор роста эндотелия сосудов.

Уменьшение высвобождения LL-37 из SBDS возможно двумя путями. Во-первых, SBDS ингибирует KLK-5, фермент, который превращает белок-предшественник кателицидина (hCAP) 18 в LL-37. Во-вторых, SBDS ингибирует 5-LO, фермент, который синтезирует LTA ₄ , предшественник LTB ₄ , липидного медиатора, который индуцирует высвобождение LL-37.Более того, между LTB ₄ и LL-37 существует петля положительной обратной связи, так что увеличение LL-37 дополнительно активирует 5-LO. При наличии SBDS активация этой обратной связи может быть заблокирована из-за снижения генерации LL-37. Ось LTB ₄ / LL-37 / Ca ²⁺ / гранулярное высвобождение, по-видимому, имеет отношение к пациентам с розацеа, так как LL-37 и KLK-5 сверхэкспрессируются у пациентов с розацеа. ³⁴ У мышей инъекция LL-37 привела к проявлению клинических признаков розацеа, таких как эритема, телеангиэктазия и воспаление, возможно, за счет повышенной экспрессии IL-1, IL6 и MMP9 в тучных клетках. ^35,36 Кроме того, LL-37 влияет на ангиогенез, усиливая пролиферацию эндотелиальных клеток. ³⁷

LL-37 вызывает высвобождение кальция, который, в свою очередь, связан с синтезом ROS ⁶ и высвобождением KLK5. ³⁸ Более того, передача сигналов кальция связана с мобилизацией гранул. ³⁹ В нейтрофилах существует четыре типа гранул: первичные гранулы содержат воспалительные ферменты, такие как эластаза, протеиназа 3 (дополнительная протеаза, которая расщепляет hCAP18 до LL-37), вторичные гранулы загружены, среди прочего, лактоферрином и hCAP18; в третичных гранулах обнаруживается MMP9; секреторный пузырь представляет четвертый тип гранул. ^39–41 Эти гранулы различаются по содержанию, а также по степени мобилизации. Третичные гранулы мобилизуются легче, чем вторичные гранулы, которые снова подвергаются экзоцитозу более легко, чем первичные гранулы. ⁴² Компоненты НАДФН-оксидазы (gp ⁹¹ phox, p ²² phox), которые синтезируют ROS, были обнаружены во вторичных, третичных гранулах и в секреторном пузырьке, ⁴² , тогда как VEGF, как предполагалось, располагался во вторичных гранулы. ²³ Кажется, что SBDS специфически предотвращает высвобождение первичных и вторичных гранул, потому что SBDS снижает высвобождение эластазы, VEGF и ROS, но не MMP9 (рис. 5).Нельзя полностью исключить, что отсутствие эффекта на MMP9 может быть связано с высокой базальной продукцией MMP9 в нестимулированных нейтрофилах (без fMLP), возможно, из-за артефактических эффектов изоляции клеток из крови. ⁴³ Однако влияние SBDS на высвобождение ROS казалось более выраженным, чем на другие переменные, поэтому может иметь место дополнительное действие соединения. Уменьшение LL-37 с помощью SBDS может быть связано с предотвращением мобилизации первичных и вторичных гранул, поскольку эти гранулы содержат hCAP18.Однако снижение уровня LL-37 также может быть связано с ингибированием 5-LO или KLK5 с помощью SBDS. Подавляет ли SBDS высвобождение вторичных и первичных гранул и опосредуется ли этот эффект через ингибирование передачи сигналов кальция, еще предстоит выяснить в дальнейших исследованиях.

SBDS увеличивает экспрессию мРНК CCL2 в нейтрофилах и тем самым, возможно, способствует привлечению экспрессирующих CCR2 клеток, таких как моноциты. Поскольку моноциты, в зависимости от воспалительной среды, могут дифференцироваться в макрофаги M1 или M2 с провоспалительной и провоспалительной ролью, соответственно, окончательный эффект SBDS на воспалительные процессы все еще неясен.Кроме того, LL-37 увеличивает высвобождение цитокинов и хемокинов из лейкоцитов и оказывает хемотаксическое действие на большое количество иммунных клеток. ⁴⁴ Таким образом, благодаря своему подавляющему эффекту LL-37, SBDS, возможно, противодействует выходу повышенной экспрессии CCL2. Более того, ROS ответственны за инициирование нескольких провоспалительных эффектов в коже, включая экспрессию привлекающих лейкоциты хемокинов CCL2 и CXCL8. ⁴⁵ Таким образом, за счет снижения ROS, SBDS, возможно, противодействует повышенной экспрессии CCL2 и предотвращает индукцию провоспалительных эффектов.Однако воспалительная реакция при розацеа, по-видимому, сложна, и необходимо учитывать другие клетки и механизмы. Экспрессия пути Toll-подобного рецептора и некоторых других хемокинов, чем те, которые мы измеряли, генерируемых лимфоцитами или фибробластами, совсем недавно была показана при биопсии розацеа. ⁴⁶ Следовательно, в ответ на SBDS стоит рассмотреть более обширный анализ экспрессии генов хемокинов и других медиаторов этими другими типами клеток.

Интересно, что доксициклин, который также используется для лечения розацеа, показал эффекты, аналогичные эффектам SBDS. Следующие эффекты были получены / опубликованы для SBDS и доксициклина: 1) Ингибирование активности KLK5 ⁴⁷ и MMP9, ⁴⁸ снижение высвобождения LL-37 ⁴⁹ и ROS ⁴⁷ доксициклином и SBDS. 2) Снижение высвобождения VEGF с помощью SBDS и ингибирование ангиогенеза доксициклином, показанное в HUVEC. ⁴⁸ 3) Ингибирование высвобождения цитокинов (IL6, IL8, TNFα) в LPS-индуцированных клетках HaCaT доксициклином ⁵⁰ , но не влияет на SBDS на экспрессию мРНК IL8 и TNFα в нейтрофилах.Эти данные указывают на то, что доксициклин и SBDS, возможно, проявляют свои эффекты схожими путями. Однако необходимы дальнейшие исследования, которые напрямую сравнивают эти стратегии лечения in vitro, чтобы получить более подробное представление о механизме действия SBDS.

Выводы

SBDS, по-видимому, оказывает свое противовоспалительное действие при розацеа посредством нескольких механизмов, но основной мишенью может быть ось LTB ₄ / LL-37 / Ca ²⁺ / гранулярное высвобождение. Наши данные предполагают, что SBDS, возможно, регулирует противовоспалительные процессы (например, снижение рекрутирования иммунных клеток и высвобождение цитокинов другими иммунными клетками, пролиферацию эндотелиальных клеток и ангиогенез) путем подавления высвобождения LL-37, ROS, эластазы и VEGF из нейтрофилов.Таким образом, SBDS опосредует, по крайней мере частично, противовоспалительные эффекты, снижая некоторые эффекторные функции нейтрофилов. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы прояснить биологическое значение наблюдаемых эффектов и изучить лежащие в основе механизмы.

Сокращения

7-AAD, 7-аминоактиномицин; ANOVA, дисперсионный анализ; APMA, пара-аминофенилртути ацетат; FACS, сортировка клеток по активации флуоресценции; FCS, фетальная телячья сыворотка; fMLP, формилметиониллейцилфенилаланин; GAPDH, глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа; GM-CSF, гранулоцитарный макрофагальный колониестимулирующий фактор; HBSS, сбалансированный солевой раствор Хэнка; ИЛ, интерлейкин; KLK5, калликреин 5; 5-ЛО, 5-липоксигеназа; LTB4, лейкотриен B4; MMP9, матричная металлопротеиназа 9; PBS, фосфатно-солевой буфер; PBMC, мононуклеарные клетки периферической крови; ПМА, форбол-12-миристат-13-ацетат; RFU — единица относительной флуоресценции; RT — комнатная температура; SBDS, сухое вещество битуминосульфоната натрия; SAAVNA, N-сукцинил-Ala-Ala-Val-п-нитроанилид; TNFα, фактор некроза опухоли альфа.

Благодарность

Эта работа была поддержана Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz (LOEWE), Centre Translationale Medizin und Pharmakologie (TMP) и частично профинансирована ICHTHYOL-GESELLSCHAFT Cordes, Hermanni & Co. (GmbH & Co.) KG.

Авторские взносы

Все авторы внесли значительный вклад в представленную работу, будь то концепция, дизайн исследования, выполнение, сбор данных, анализ и интерпретация, или во всех этих областях; принимал участие в написании, редактировании или критическом рецензировании статьи; дал окончательное одобрение версии, которая будет опубликована; договорились о журнале, в который была подана статья; и соглашаемся нести ответственность за все аспекты работы.

Финансирование

Исследование частично финансировалось ICHTHYOL-GESELLSCHAFT Cordes, Hermanni & Co. (GmbH & Co.) KG.

Раскрытие информации

Текущий адрес M.J.P. это EpiEndo Pharmaceuticals ehf, 170 Сельтьярнарнес, Исландия. Проф. M.J.P. также сообщает о контрактном вознаграждении от ICHTHYOL-GESELLSCHAFT Cordes, Hermanni & Co. (GmbH & Co.) KG, грантах от Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz (LOEWE), Centre Translationale Medizin und Pharmakologie (TMP) в штате Гессен. проведение исследования.Авторы не сообщают о других конфликтах интересов в этой работе.

Список литературы

1. Чжан Х., Тан К., Ван И, Фанг Р., Сунь К. Лечение розацеа: обзор и обновление. Дерматол Тер . 2021; 11 (1): 13–24. DOI: 10.1007 / s13555-020-00461-0

2. Гетер Л., Овергаард Л.К., Эгеберг А., Тиссен Дж.П. Заболеваемость и распространенность розацеа: систематический обзор и метаанализ. Br J Dermatol . 2018. 179 (2): 282–289. DOI: 10.1111 / bjd.16481

3. Будденкотте Дж., Штайнхофф М.Последние достижения в понимании и лечении розацеа. F1000Res . 2018; 7: 1885. DOI: 10.12688 / f1000research.16537.1

4. Ву Ю. Р., Лим Дж. Х., Чо Д. Х., Парк Х. Дж. Розацеа: молекулярные механизмы и лечение хронического воспалительного состояния кожи. Инт. Дж. Мол. Sci . 2016; 17 (9): 1562. DOI: 10.3390 / ijms17091562

5. Meyer-Hoffert U, Schroder JM. Эпидермальные протеазы в патогенезе купероза. J Investigation Dermatol Symp Proc . 2011; 15 (1): 16–23.DOI: 10.1038 / jidsymp.2011.2

6. Чжэн Й., Нийонсаба Ф., Ушио Х. и др. Кателицидин LL-37 вызывает образование активных форм кислорода и высвобождение человеческих альфа-дефензинов из нейтрофилов. Br J Dermatol . 2007. 157 (6): 1124–1131. DOI: 10.1111 / j.1365-2133.2007.08196.x

7. Милликен Л. Предлагаемая воспалительная патофизиология розацеа: значение для лечения. Обрезанный кожей . 2003. 2 (1): 43–47. DOI: 10.1111 / j.1540-9740.2003.01876.x

8. Куроки М., Voest EE, Amano S и др.Активные кислородные промежуточные продукты увеличивают экспрессию фактора роста эндотелия сосудов in vitro и in vivo. Дж. Клин Инвест . 1996. 98 (7): 1667–1675. DOI: 10.1172 / JCI118962

9. Гербер П.А., Бухрен Б.А., Стейнхофф М., Хоми Б. Розацеа: сеть цитокинов и хемокинов. J Investigation Dermatol Symp Proc . 2011; 15 (1): 40–47. DOI: 10.1038 / jidsymp.2011.9

10. Diezel W, Schewe T., Rohde E, Rosenbach T., Czarnetzki BM. [Битумосульфонат аммония (ихтиол). Противовоспалительный эффект и угнетение фермента 5-липоксигеназы. Hautarzt . 1992. 43 (12): 772–774. [Немецкий].

11. Унна П.Г. Aphorismen über Schwefeltherapie und Schwefelpräparate. IV Ихтиол. Monatshefte für Praktische Dermatologie . 1882; 1: 328–333.

12. Чарнецкий BM. Ингибирующее действие сланцевых масел (ихтиолов) на секрецию хемотаксических лейкотриенов из лейкоцитов человека и на миграцию лейкоцитов. J Исследование Dermatol . 1986. 87 (6): 694–697. DOI: 10.1111 / 1523-1747.ep12456630

13.Schewe C, Schewe T, Rohde E, Diezel W, Czarnetzki BM. Ингибирующее действие сульфированных сланцевых масел (битуминосульфонатов аммония, ихтиолов) на ферменты метаболизма полиеновых жирных кислот. Arch Dermatol Res . 1994. 286 (3–4): 137–141. DOI: 10.1007 / BF00374208

14. Ковнацки Э., Капп А., Урих С. ​​Ингибирующее действие сульфированных сланцевых масел (битуминосульфонат аммония) на стимуляцию нейтрофильных гранулоцитов хемотаксическим трипептидом f-Met-Leu-Phe. Arch Dermatol Res .1986. 278 (3): 190–193. DOI: 10.1007 / BF00412922

15. Пантке Р. Бактериологические исследования препаратов из сланцевого масла. Arzneimittel-Forschung . 1965. 15 (5): 570–573. [Немецкий].

16. Листеманн Х., Шолерманн А., Мейгель В. Противогрибковая активность сульфированных сланцевых масел. Arzneimittel-Forschung . 1993. 43 (7): 784–788. [Немецкий].

17. Boyd AS. Снова об ихтаммоле. Инт Дж Дерматол . 2010. 49 (7): 757–760. DOI: 10.1111 / j.1365-4632.2010.04551.x

18.Бакли Д.А., Рут Т., Бат С. Специальные препараты, рекомендованные британской ассоциацией дерматологов для лечения кожных заболеваний. Лондон, Великобритания: Отдел клинических стандартов Британской ассоциации дерматологов; 2014: 9 Доступно по адресу: www.bad.org.uk/specials. По состоянию на 31 мая 2021 г.

19. Кох Р., Уилбранд Г. Темное сульфированное сланцевое масло против плацебо в системном лечении розацеа. J Euro Acad Dermatol Venereol . 1999; 12 (2 доп.): 143.

20. Rabe KF, Perkins RS, Dent G, Gustmann H, Barnes PJ.Ингибирующее действие фракций сульфированного сланцевого масла на окислительный взрыв и мобилизацию Са ++ в стимулированных макрофагах. Arzneimittel-Forschung . 1994. 44 (2): 166–170.

21. Ковнацки Э., Урих С., Шопф Э. Влияние сульфированного экстракта сланцевого масла (ихтиол) на миграцию нейтрофильных гранулоцитов человека in vitro. Arch Dermatol Res . 1984. 276 (4): 235–239. DOI: 10.1007 / BF00414234

22. Канаширо А., Соуза Дж. Г., Кабея Л. М., Аззолини А. Е., Лучисано-Валим Ю. М..Высвобождение эластазы стимулированными нейтрофилами, подавляемыми флавоноидами: важность группы катехолов. Z Naturforsch C J Biosci . 2007. 62 (5–6): 357–361. DOI: 10.1515 / znc-2007-5-607

23. Gaudry M, Bregerie O, Andrieu V, El Benna J, Pocidalo MA, Hakim J. Внутриклеточный пул фактора роста эндотелия сосудов в нейтрофилах человека. Кровь . 1997. 90 (10): 4153–4161. DOI: 10.1182 / blood.V90.10.4153

24. Troeberg L, Nagase H. Мониторинг активности металлопротеиназы с использованием синтетических флуорогенных субстратов. Curr Protoc Protein Sci . 2004; Блок – 21.16.

25. Мацубара Ю., Мацумото Т., Косеки Дж., Канеко А., Айба С., Ямасаки К. Ингибирование протеазы калликреина 5 человека тритерпеноидами из природных источников. Молекулы . 2017; 22 (11): 1829. DOI: 10.3390 / молекулы22111829

26. Ван М., Сабирш А, Веттерхольм А, Агерберт В, Хеггстром Дж. З. Лейкотриен B4 запускает высвобождение кателицидина LL-37 из нейтрофилов человека: новые липидно-пептидные взаимодействия в ответах врожденного иммунитета. FASEB J . 2007. 21 (11): 2897–2905. DOI: 10.1096 / fj.06-7974com

27. Wisniewska JM, Rodl CB, Kahnt AS, et al. Молекулярная характеристика EP6 — нового прямого ингибитора 5-липоксигеназы на основе имидазо [1,2-a] пиридина. Биохим Фармакол . 2012. 83 (2): 228–240. DOI: 10.1016 / j.bcp.2011.10.012

28. Chen Y, Junger WG. Измерение окислительного взрыва нейтрофилов. Методы Мол Биол . 2012; 844: 115–124.

29. Ингельфингер Р., Хенке М., Розер Л. и др.Раскрытие фармакологического потенциала экстрактов лишайников в контексте рака и воспалений с помощью широкого подхода к скринингу. Фронт Pharmacol . 2020; 11: 1322. DOI: 10.3389 / fphar.2020.01322

30. Хаяси Ф, Средство ТК, Глянец AD. Toll-подобные рецепторы стимулируют функцию нейтрофилов человека. Кровь . 2003. 102 (7): 2660–2669. DOI: 10.1182 / кровь-2003-04-1078

31. Vermes I, Haanen C, Steffens-Nakken H, Reutelingsperger C. Новый тест на апоптоз. Проточно-цитометрическое определение экспрессии фосфатидилсерина в клетках с ранним апоптозом с использованием флуоресцеина, меченного аннексином V. Дж. Иммунол Методы . 1995. 184 (1): 39–51. DOI: 10.1016 / 0022-1759 (95) 00072-I

32. Розалес С. Нейтрофилы: клетка, играющая множество ролей в воспалении, или клетки нескольких типов? Front Physiol . 2018; 9: 113. DOI: 10.3389 / fphys.2018.00113

33. McMahon F, Banville N, Bergin DA, et al. Активация нейтрофилов через путь IP3 после воздействия демодекс-ассоциированных бактериальных белков. Воспаление . 2016; 39 (1): 425–433. DOI: 10.1007 / s10753-015-0264-4

34.Ямасаки К., Ди Нардо А., Бардан А. и др. Повышенная активность сериновой протеазы и кателицидина способствует воспалению кожи при розацеа. Нат Мед . 2007. 13 (8): 975–980. DOI: 10,1038 / нм1616

35. Kim M, Kim KE, Jung HY, et al. Рекомбинантный регулятор дифференцировки эритроидов 1 ингибирует как воспаление, так и ангиогенез на мышиной модели розацеа. Exp Dermatol . 2015; 24 (9): 680–685. DOI: 10.1111 / exd.12745

36. Muto Y, Wang Z, Vanderberghe M, Two A, Gallo RL, Di Nardo A.Тучные клетки являются ключевыми медиаторами воспаления кожи, инициированного кателицидином, при розацеа. J Исследование Dermatol . 2014. 134 (11): 2728–2736. DOI: 10.1038 / jid.2014.222

37. Schwab VD, Sulk M, Seeliger S, et al. Нервно-сосудистые и нейроиммунные аспекты патофизиологии розацеа. J Investigation Dermatol Symp Proc . 2011. 15 (1): 53–62. DOI: 10.1038 / jidsymp.2011.6

38. Yamasaki K, Kanada K, Macleod DT, et al. Экспрессия TLR2 увеличивается при розацеа и стимулирует повышенную продукцию сериновой протеазы кератиноцитами. J Исследование Dermatol . 2011. 131 (3): 688–697. DOI: 10.1038 / jid.2010.351

39. Лейси П. Механизмы дегрануляции нейтрофилов. Allergy Asthma Clin Immunol . 2006. 2 (3): 98–108. DOI: 10.1186 / 1710-1492-2-3-98

40. Соренсен О.Е., Фоллин П., Йонсен А.Х. и др. Кателицидин человека, hCAP-18, процессируется до антимикробного пептида LL-37 внеклеточным расщеплением протеиназой 3. Кровь . 2001. 97 (12): 3951–3959. DOI: 10.1182 / blood.V97.12.3951

41.Чернок Э., Людеманн Дж., Гросс В.Л., Бейнтон Д.Ф. Ультраструктурная локализация протеиназы 3, антигена-мишени антицитоплазматических антител, циркулирующих при гранулематозе Вегенера. Ам Дж. Патол . 1990. 137 (5): 1113–1120.

42. Коулэнд Дж. Б., Боррегаард Н. Молекулярная характеристика и паттерн тканевой экспрессии гена липокалина, ассоциированного с желатиназой нейтрофилов, от человека. Геномика . 1997. 45 (1): 17–23. DOI: 10.1006 / geno.1997.4896

43. Маковски Г.С., Рамсби М.Л.Желатинолитическая и фибринолитическая активность в свежезамороженной плазме. Дж. Биомед. Наука . 2004. 11 (4): 531–533. DOI: 10.1007 / BF02256103

44. Schauber J, Gallo RL. Расширение роли антимикробных пептидов в коже: тревожные и вооруженные кератиноциты. J Исследование Dermatol . 2007. 127 (3): 510–512. DOI: 10.1038 / sj.jid.5700761

45. Ли Х.М., Шин Д.М., Ким К.К., Ли Дж.С., Пайк Т.Х., Джо Е.К. Роль активных форм кислорода в экспрессии CXCL8 и CCL2 в ответ на 30-кДа антиген Mycobacterium tuberculosis. Дж. Клин Иммунол . 2009. 29 (1): 46–56. DOI: 10.1007 / s10875-008-9222-3

46. Sun Y, Chen LH, Lu YS, et al. Идентификация новых генов-кандидатов при розацеа биоинформатическими методами. Цитокин . 2021; 141: 155444. DOI: 10.1016 / j.cyto.2021.155444

47. Schaller M, Schofer H, Homey B, et al. Современное состояние: системное ведение розацеа. J Dtsch Dermatol Ges . 2016; 14 (Дополнение 6): 29–37.

48. Su W, Li Z, Li F, Chen X, Wan Q, Liang D. Опосредованное доксициклином ингибирование ангиогенеза роговицы: MMP-независимый механизм. Инвест офтальмол Vis Sci . 2013. 54 (1): 783–788. DOI: 10.1167 / iovs.12-10323

49. Kanada KN, Nakatsuji T, Gallo RL. Доксициклин косвенно подавляет протеолитическую активацию триптических калликреин-связанных пептидаз и активацию кателицидина. J Исследование Dermatol . 2012. 132 (5): 1435–1442. DOI: 10.1038 / jid.2012.14

50. Ди Каприо Р., Лембо С., Ди Костанцо Л., Балато А., Монфрекола Г. Противовоспалительные свойства низких и высоких доз доксициклина: исследование in vitro. Медиаторы воспаления . 2015; 2015: 329418. DOI: 10.1155 / 2015/329418

Сравнение применения гепариноида и ихтаммола глицерина у пациентов с флебитом

Луай Фархан Згаир

Хасан Али Абед аз-Зуби

Фредрик ОДЖИА

Турсунходжаева Фируза М.

Фараз Ахмед Фаруки

Эрик Рэнди Рейес Политуд

Elsadig Gasoom FadelAlla Эльбашир

Ипен, Аша Сара

Доктор.Арун Кумар A

Д-р Зафар Икбал

Д-р ШАХЕРА С.ПАТЕЛ

Доктор Ручика Ханна

Доктор Реджеп ТАС

Д-р Раша Али Эльдиб

Доктор Пралхад Канхайялал Рахангдейл

DR.ПАТРИК Д. ЧЕРНА

Д-р Николас Падилья-Райгоза

Д-р Мустафа Ю. Г. Юнис

Д-р Мухаммад Шоаиб Ахмедани

DR. МУХАММАД ИСМАИЛ МОХМАНД

DR. МАХЕШ ШИВАДЖИ ЧАВАН

DR.М. АРУНА

Доктор Лим Джи Ни

Д-р Джатиндер Пал Сингх Чавла

DR. ИРАМ БОХАРИ

Доктор ФАРХАТ НАЗ РАХМАН

Доктор Девендра Кумар Гупта

Д-р АШВАНИ КУМАР ДУБЕЙ

Доктор.Али Сейди

Д-р Ахмад Чоэрудин

Д-р Ашок Кумар Верма

Тхи Монг Дьеп НГУЕН

Д-р Мухаммад Акрам

Д-р Имран Азад

Доктор Минакши Малик

Асеил Хади Хамза

Анам Бхатти

мкр.Амир Хоссейн

Ахмет Ипекши

Мирзади Гохари

Репродуктивное поведение и социальная организация рыб-помакантид Genicanthus lamarck на острове Мактан, Филиппины, по JSTOR

Абстрактный

На острове Мактан, Филиппины, Genicanthus lamarck образовал суточные скопления, состоящие из нескольких самцов, которые питались водной толщей на глубинах от 15 до 40+ метров.В совокупности самок значительно превосходил самцов. Самцы не защищали определенные участки субстрата, но обычно находились в фиксированных положениях относительно других самцов в пределах высокомобильной агрегации. Агрессия между мужчинами была частой. Самки свободно перемещались по скоплению, взаимодействуя с каждым самцом и с минимальной агрессией самки к самке. Нерест оказался беспорядочным; свидетельств наличия гаремов не обнаружено. Наблюдения за Genicanthus spp. в других источниках предполагается, что гаремические социальные группы могут встречаться в популяциях с низкой плотностью населения.Хотя есть много общего между репродуктивным поведением G. lamarck и других помакантид, о которых сообщалось ранее, существуют важные различия. Некоторые виды, используемые другими помакантидами исключительно для ухаживания во время нереста заката, используются Г. Ламарком в течение дня. Это и другие различия обсуждаются применительно к планктоноядным привычкам этого вида.

Информация о журнале

Copeia — это всемирно уважаемый и широко цитируемый ежеквартальный журнал, в котором публикуются оригинальные исследования рыб, амфибий и рептилий с упором на систематику, экологию, сохранение, поведение, генетику, морфологию и физиологию.

Информация об издателе

Американское общество ихтиологов и герпетологов посвящено научное изучение рыб, земноводных и рептилий. Основные акценты Общество должно увеличивать знания об этих организмах, распространять эти знания посредством публикаций, конференций, симпозиумов и других средств, и поощрять и поддерживать молодых ученых, которые будут делать успехи в будущем. в этих областях. Программы Американского общества ихтиологов и Герпетологи участвуют в глобальных усилиях по интерпретации, пониманию и сохранению природное разнообразие Земли и способствовать разумному использованию природных ресурсов на благо человечества.

заявок

Онлайн-заявки

Регистрация и логин необходимы для отправки элементов онлайн и для проверки статуса текущих отправлений.

Руководство для авторов

(Иранский журнал ихтиологии)

1. Процесс подачи

Все статьи должны быть представлены только через «Систему подачи журналов». Статьи принимаются к публикации при том понимании, что они не были опубликованы и не будут рассматриваться для публикации в другом месте.Авторы должны подтвердить, что ни рукопись, ни ее основное содержание еще не были опубликованы или отправлены для публикации в другом журнале. Форма выпуска авторских прав, подписанная соответствующим автором от имени всех авторов, должна сопровождать все представленные документы. Рукописи могут быть отклонены без рецензирования главным редактором, если они не соответствуют инструкциям для авторов или выходят за рамки журнала.

Все авторы, сообщающие об экспериментах с рыбами, должны подтвердить в разделе «Материалы и методы», что с рыбами обращались в соответствии с руководящими принципами местного комитета по этике.Исследования с участием неоправданного количества исчезающих или редких видов могут быть неприемлемы.

2. Подготовка рукописи

Стиль и формат

Рукописи должны быть в одну колонку с полями 25 мм со всех сторон на страницах формата Letter шрифтом Times New Roman (12). Каждая страница рукописи должна быть пронумерована соответственно. Весь текст должен быть выровнен. За исключением первого абзаца в каждом разделе, все абзацы должны иметь отступ ровно 5 мм с использованием клавиши табуляции на панели линейки (не пробела) и без пробелов между абзацами.Сноски, концевые сноски и любые разрывы (разрывы страниц, непрерывные разрывы и т. Д.) Не допускаются.

Рукописи должны быть написаны на английском языке. Авторам, для которых английский язык не является родным, настоятельно рекомендуется убедиться, что их рукопись рецензировал коллега, свободно владеющий английским языком, или профессиональный языковой редактор. Следует использовать лаконичный английский без жаргона. Следует избегать повторяющегося использования длинных предложений и пассивного залога. Настоятельно рекомендуется обрабатывать текст с помощью компьютерных программ проверки орфографии и грамматики.Приемлемо английское или американское написание, но оно должно быть последовательным во всем.

Символы, единицы измерения и сокращения

В целом журнал следует соглашениям научного стиля и формата , Руководства CSE для авторов, редакторов и издателей Совета научных редакторов, Рестон, штат Вирджиния, США ( 7 ^-е изд.). Если используются такие символы, как ×, μ, η или ν, их следует добавить с помощью меню «Символы» Word. В меню «Символ» следует использовать символы градусов (°), а не букву o или цифру 0 в верхнем индексе.Необходимо использовать символы умножения (×), а не букву x. Нельзя вставлять пробелы между числами и единицами измерения (например, 3 кг), между числами и математическими символами (+, -, ×, =, <,>) и между числами и символами процентов и градусов (например, 45%, 18 ° C. ).

Используйте единицы СИ. Как правило, все числа, состоящие из двух или более цифр, следует указывать в виде цифр, за исключением случаев, когда они стоят в начале предложения (например, около 99 экземпляров…, девяносто девять экземпляров…). Однозначные числа следует указывать буквами, если за ними не следуют математические символы, символы процентов или градусов (например,г., около девяти экземпляров…, около 2 кг…, 3%, 8 ° C). Все сокращения и акронимы должны быть определены при первом упоминании. Латинские термины, такие как et al., In vitro или in situ, не следует выделять курсивом.

Содержание рукописи

Исследовательские статьи должны быть разделены на следующие основные разделы: титульный лист, аннотация, введение, материалы и методы, результаты, обсуждения и выводы, благодарности и ссылки. Пожалуйста, смотрите ниже информацию о других типах рукописей.

Титульный лист

Первая страница должна содержать полное название в регистре предложений (например, аннотированный контрольный список пресноводных рыб Ирана), полные имена (фамилии полностью заглавные), принадлежность (кафедра, факультет, университет, Город, Страна) и контактные адреса электронной почты всех авторов. Соответствующий автор должен быть четко обозначен звездочкой в ​​верхнем индексе ( ^* ).

Реферат

Реферат должен быть кратким и резюмирует только важных выводов статьи и дает четкую информацию об исследовании и полученных результатах и ​​должен содержать 150–250 слов.Реферат не должен содержать цитат.

Ключевые слова

Укажите 3-5 ключевых слов , которые не включены в заголовок , с максимальной длиной 100 символов (включая знаки препинания и интервалы), чтобы обеспечить поиск и индексацию. Следует избегать сокращений.

Введение

Это должно привести аргументы в пользу вашего исследования, излагая только основные предпосылки, и не должно включать выводы или заключения. Это не должен быть обзор предметной области, а должен заканчиваться четким изложением рассматриваемого вопроса (целей или задач).

Материалы и методы

Пожалуйста, предоставьте краткую, но полную информацию об используемых материалах, методах и аналитических и статистических процедурах. Эта часть должна быть как можно более четкой, чтобы другие ученые могли повторить представленное исследование. Для всего упомянутого оборудования, инструментов, химикатов и т. Д. Должны быть указаны торговые марки и адреса компаний.

Результаты

Те же данные или информация, приведенные в таблице, не должны повторяться на рисунке и наоборот.Недопустимо подробно повторять в тексте числа из таблиц или давать пространные пояснения к таблицам или рисункам.

Обсуждения и выводы

Не следует повторять здесь утверждения из разделов «Введение» и «Результаты». В последнем абзаце следует выделить основные выводы исследования; не включайте «Выводы» в отдельный заголовок. При необходимости допускается объединение результатов и обсуждения.

Благодарности

Для физических лиц используйте только инициалы для имен и без титулов.Названия финансирующих организаций следует писать полностью.

Ссылки

Ссылки должны быть цитированы в тексте по фамилии (именам) автора (ов) и году публикации без запятой между ними: например, (Nelson 2006) или (Bianco & Banarescu 1982 ). Если цитата является темой предложения, в скобках должна быть указана только дата: «Согласно Коаду (2009)…». Для цитирования ссылок с 3 или более авторами только имя первого автора, за которым следует et al.(не выделено курсивом) следует использовать: (Hrbek et al. 2006). Если в один и тот же год имеется более одной ссылки на одного и того же автора, добавьте буквы a, b и т. Д. К году: (Johal et al. 2004a, b). Ссылки должны быть перечислены в тексте в хронологическом порядке через запятую: (Bianco & Banarescu 1982; Hrbek et al. 2006; Coad 2009). Не включайте личные сообщения и неопубликованные данные в качестве ссылок, хотя такие материалы могут быть вставлены в скобки в тексте (B.W. Coad 2013, перс.комм.). В случае публикаций на языках, отличных от английского, опубликованное название на английском языке должно быть предоставлено, если оно существует, с пометкой типа «(на фарси с аннотацией на английском языке)».

Список литературы должен быть указан в алфавитном порядке в конце текста без нумерации. Все авторы должны быть включены в списки литературы. Рукопись должна быть тщательно проверена, чтобы убедиться, что написание имен авторов и года в тексте точно такое же, как указано в списке литературы. Названия журналов должны быть даны полностью. Ссылки должны быть отформатированы следующим образом (обратите внимание на знаки пунктуации и заглавные буквы). Список использованной литературы должен быть расположен в алфавитном порядке по фамилии первого автора и изложен следующим образом:

Журнальные статьи

Boisvert, C.A. 2005. Тазовый плавник и пояс Panderichthys и происхождение передвижения четвероногих. Природа 438: 1145–1147.

Богуцкая, Н.Г. И Коад, Б.W. 2009. Обзор количества позвонков и лучей плавников в роде Alburnoides (Teleostei: Cyprinidae) с описанием шести новых видов. Zoosystematica Rossica 18: 126-173.

Книги

Nelson, J.S. 1994. Рыбы мира . 3-е издание. John Wiley & Sons, США.

Главы в книгах

Nagahama, Y .; Йошикуни, М .; Yamashita, M .; Токумото, Т. и Кацу, Ю. 1995. Регулирование роста и созревания ооцитов у рыб. В: Педерсон, Р.A. & Schatten, G. (ред.), Текущие темы биологии развития , Vol. 30. Academic Press, США. С. 103–145.

Тезисы

Армантроут, Н.Б. 1980. Пресноводные рыбы Ирана. Кандидатская диссертация. Департамент рыболовства, Государственный университет Орегона, Корваллис, Орегон, США.

Саадати, M.A.G. 1977 г. Таксономия и распространение пресноводных рыб Ирана. Магистерская диссертация. Департамент рыболовства, Государственный университет Колорадо, Форт-Коллинз, Колорадо, США.

Отчеты

Смит, Д.К. и Стюарт, Б.Д. 1994. Разработка методов старения промысловых руд и руд. Заключительный отчет для Корпорации исследований и развития рыболовства, ПРОЕКТ 91/36, США.

Материалы конференции

Nezameslami, A .; Кейвани Ю. и Дорафшан С. 2013. Сравнение морфологических признаков (Cyprinidae : Garra rufa ) в бассейне реки Кархех. В: Тезисы Первой иранской конференции по ихтиологии, Исфаханский технологический университет, 15-16 мая 2013 г., стр.93.

Ghanbarzadeh, M .; Soofiani, N.M .; Кейвани, Ю. и Тагави Мотлаг, С.А. 2013. Исследование привычек кормления леща-солдата (Sparidae: Argyrops spinifer ) в зависимости от сезона, пола и размера рыбы в прибрежных водах провинции Бушер. Иранская конференция по ихтиологии, Исфаханский технологический университет, 15–16 мая 2013 г., стр. 217–222.

Электронные ссылки

Coad, B.W. 2013. Пресноводные рыбы Ирана. www.briancoad.com (по состоянию на 28 августа 2013 г.).

Порядок в списке должен быть

(i) Отдельные авторы. Если на одного автора дается более одной ссылки, публикации должны быть перечислены в хронологическом порядке.

(ii) Два автора. Их следует расположить сначала в алфавитном порядке, а затем в хронологическом порядке. Для цитирования текста используйте имена авторов и год. Не используйте et al. для двухавторских ссылок.

(iii) Три или более авторов. Их следует расположить в хронологическом порядке.Для всех цитирований текста используйте только фамилию первого автора, а затем и др. и дату.

Если цитируется более одной ссылки одного и того же автора (ов), опубликованной в одном и том же году, используйте a, b и т. Д. После года как в тексте, так и в списке, например, (1963a). Цитирование текста может быть дано одним из двух способов: (а) с датой в круглых скобках, «как показано Джонс (1956)»; (b) с именами и датой в скобках, «согласно недавним открытиям (Jones 1956)». Если в тексте цитируется более одной ссылки, они должны быть в хронологическом порядке , e.грамм. Смит 1975, Арнольд 1981, Джонс 1988. Названия журналов должны быть даны полностью . Укажите имена и инициалы всех авторов, полное название статьи, номер тома и номера страниц. Авторы должны проверить, что все цитаты в тексте находятся в списке литературы и наоборот , и что их даты совпадают. Заголовки журналов, книги и любые другие материалы в списке литературы, которые будут выделены курсивом при печати, должны быть выделены курсивом или подчеркнуты в рукописи.

Таблицы и рисунки

— Все иллюстрации (фотографии, рисунки, графики и т. Д.), За исключением таблиц, должны иметь пометку «Рис.» Рисунки должны быть представлены как в рукописи, так и отдельными файлами в формате JPG или TIFF. Все надписи должны быть написаны непосредственно на рисунках в графическом программном обеспечении (например, Photoshop), а не как символы слов в MSWord. Несколько фигур должны быть сгруппированы и помечены как (A), (B), (C) и т. Д. В графическом программном обеспечении. Все рисунки и таблицы должны быть размещены в тексте в соответствующих местах, а не в конце.

— Все таблицы и рисунки должны иметь заголовок и / или легенду и быть пронумерованы (например, Таблица 1, Рис. 2). Подписи должны быть написаны в регистре предложений (например, Карта распространения Iranocichla гормузенсис ). На рисунках должен использоваться шрифт Times New Roman. Если используются такие символы, как ×, μ, η или ν, их следует добавить с помощью меню «Символы» Word.

— Все таблицы и рисунки должны быть пронумерованы последовательно, как они упоминаются в тексте. См. Таблицы и рисунки с заглавными буквами и сокращениями (например,g., «Как показано на Рис. 2, Рис. 2a, Рис. 2 и 3, рис. 2-4). Таблицы и рисунки должны быть приведены и встроены в текст, где это наиболее целесообразно.

— Разрешение изображений не должно быть меньше 118 пикселей / см при ширине 16 см. Изображения должны быть отсканированы с разрешением 600 dpi и отправлены в формате JPEG или TIFF.

— Графики и диаграммы должны быть нарисованы с толщиной линии от 0,5 до 1 пункта. Графики и диаграммы с толщиной линии менее 0,5 балла или более 1 балла не принимаются.Отсканированные или фотокопии графиков и диаграмм не принимаются.

— Диаграммы должны быть подготовлены в двух измерениях, если этого не требуют используемые данные. Графики, подготовленные в трех измерениях, не принимаются.

— Рисунки, представляющие собой диаграммы, схемы или чертежи, должны быть представлены в изменяемом формате. Поэтому, если в программе, с помощью которой нарисована фигура, есть опция «сохранить как», ее необходимо сохранить как * .pdf. Если опция «сохранить как» не включает это расширение, рисунок должен быть вставлен с помощью команды вставки текстового процессора (а не скопирован и вставлен) в документ Microsoft Word как редактируемый объект.Его нельзя вставлять как файл изображения, если это не фотография. Диаграммы и графики Excel могут быть представлены в их исходном формате, то есть в файле * .exl.

— Таблицы и рисунки, включая заголовок, заголовок, заголовки столбцов и сноски, не должны превышать 16 × 20 см и быть не менее 8 см в ширину. Для всех таблиц используйте функцию Word «Создать таблицу» без текста с табуляторами или таблиц, созданных с пробелами и нарисованными линиями. Пожалуйста, не дублируйте информацию, которая уже представлена ​​на рисунках.

— Таблицы должны быть четко напечатаны через один интервал шрифтом Times New Roman кегль 9-11. При необходимости таблицы могут быть продолжены на другом листе, но указанные выше размеры остаются в силе.

— Подписи к таблицам и рисункам должны быть четко напечатаны с интервалом в 12 пунктов, шрифт Times New Roman 11.

— Номера таблиц и рисунков должны быть выделены жирным шрифтом, например, Таблица 1. Матрица данных изучаемых знаков, или Рис. 1. Карта распространения изученного вида.

Номенклатура видов

При первом упоминании названия вида в основном тексте, общее название вида, если таковое имеется, с последующим научным названием вида (латинское биномиальное название курсивом) с должны быть указаны полномочия и дата авторства.Общее название следует отделять от научного названия запятой. Описывающий орган и дата авторства должны быть разделены запятой. Например: радужная форель, Oncorhynchus mykiss (Walbaum, 1792). Первое использование названий видов в заголовке и аннотации должно включать общеупотребительные и научные названия, как указано выше, но не требовать описывающий авторитет и дату авторства.

Другие типы рукописей

Краткие сообщения

Краткие сообщения содержат исследования, которые не соответствуют всем критериям для исследовательских статей.Они должны включать всю необходимую информацию об исследовании, выводы и заголовки разделов, но не должны превышать 4 опубликованных страниц.

Просмотры и новости

Высококачественные и важные короткие рукописи от 1 до 2 страниц считаются заполнением пустых страниц в многостраничных изданиях. Принимаются следующие типы коротких рукописей:

— Мнения, взгляды и новости по актуальным вопросам, интересующим ихтиологов

— Комментарии или дополнения / исправления к статьям, ранее опубликованным в Иранском журнале ихтиологии

— Некролог памяти умершие ихтиологи

— Важные таксономические / номенклатурные заметки

— Рецензии на книги, предназначенные для ознакомления читателей с новыми или редкими таксономическими монографиями.Рецензии на книги должны быть краткими и критическими, правильно представлять книги и объяснять слабые и сильные стороны книг. С главным редактором можно проконсультироваться по поводу уместности рецензии на книгу.

Обзорные статьи

Обзоры должны быть критическими и творческими. Они должны стремиться стимулировать актуальные дискуссии и новые исследовательские инициативы. Перспективных авторов просят предоставить младшему редактору синопсис (максимум 2 страницы) своей статьи. С главным редактором можно проконсультироваться, чтобы порекомендовать подходящего заместителя редактора, к которому следует обратиться.В синопсисе следует указать, почему обзор актуален, его основные положения и задачи и как он будет стимулировать дискуссии и исследования. Когда предложение будет принято младшим редактором, он или она предложит автору представить рукопись в соответствии с Инструкциями для авторов в согласованный срок.

Специальные выпуски

Мы рассмотрим возможность публикации ограниченного числа специальных выпусков. Специальный выпуск посвящен одной четко определенной теме.Название темы появится вместе со специальным выпуском. Предложение по специальному выпуску должно быть отправлено главному редактору ([email protected]) и должно включать предварительное название, краткое изложение целей специального выпуска, предварительное расписание и список предварительных вкладов. Предложение по специальному выпуску должно быть одобрено как главным редактором, так и издателем.

3. После принятия

После того, как рукопись была принята к публикации, т.е.е. после внесения исправлений, рекомендованных рецензентом, автору не разрешается вносить изменения, которые представляют собой отклонения от рукописи, принятой редактором. Перед публикацией гранки будут отправлены автору-корреспонденту для исправления. Исправленное доказательство должно быть возвращено Издателю в течение недели с момента получения. Ошибки или упущения, возникшие из-за некоторой нашей небрежности во время окончательной печати, будут исправлены в разделе об ошибках в одном из следующих выпусков.Это не включает те ошибки, которые автор не исправил при проверке гранки.

4. Ограничения на количество страниц и сборы:

Нет ограничений на количество страниц и сборов за страницу.

5. Форма разрешения на авторские права

К рукописи должна прилагаться «Форма разрешения на авторские права», заполненная полностью и подписанная соответствующим автором. Авторское право принадлежит Иранскому обществу ихтиологии. Однако информация может быть использована в соответствии с лицензией Creative Commons.

6. Корреспонденция

Вся корреспонденция должна быть отправлена ​​главному редактору, профессору Х.Р. Эсмаили, по адресу [email protected] или [email protected].

.